ВТОРАЯ ДИРЕКТИВА КОМИССИИ от 14 мая 1982 г. по сближению законов государств-членов, касающихся методов анализа, необходимых для проверки состава косметической продукции (82/434/EEC)
КОМИССИЯ ЕВРОПЕЙСКИХ СООБЩЕСТВ,
Принимая во внимание Договор о создании Европейского экономического сообщества,
Принимая во внимание Директиву Совета 76/768/EEC от 27 июля 1976 г. о сближении законов государств-членов, касающихся косметической продукции (1), с поправками, внесенными Директивой 79/661/EEC (2), и в в частности, статью 8 (1),
Поскольку Директива 76/768/EEC предусматривает официальное тестирование косметической продукции с целью обеспечения соблюдения условий, установленных положениями Сообщества относительно состава косметической продукции;
При этом все необходимые методы анализа должны быть составлены как можно быстрее; тогда как первый шаг к достижению этой цели уже был сделан путем определения определенных методов в Директиве Комиссии 80/1335/EEC (3), второй шаг должен состоять в определении методов идентификации некоторых окислителей. и определение перекиси водорода в косметических средствах по уходу за волосами, идентификация и полуколичественное определение некоторых окислительных красителей в красках для волос, идентификация и определение нитритов, идентификация и определение свободного формальдегида, определение резорцина в шампунях и лосьонах для волос, а также определение метанола по отношению к этанолу или пропан-2-олу;
Принимая во внимание, что меры, изложенные в настоящей Директиве, соответствуют мнению Комитета по адаптации Директивы 76/768/ЕЕС к техническому прогрессу,
ПРИНЯЛ ЭТУ ДИРЕКТИВУ:
Статья 1
Государства-члены должны принять все необходимые меры для обеспечения того, чтобы во время официального тестирования косметической продукции: - идентификация окислителей и определение перекиси водорода в средствах по уходу за волосами,
- идентификация и полуколичественное определение некоторых окислительных красителей в красках для волос,
- идентификация и определение нитрита,
<р> - идентификация и определение свободного формальдегида, (1) ОЖ № Л 262, 27.9.1976, с. 169. (2) ОЖ № L 192, 31 июля 1979 г., с. 35. (3) ОЖ № L 383, 31.12.1980, с. 27.- определение резорцина в шампунях и лосьонах для волос,
- определение метанола по отношению к этанолу или пропан-2-олу
выполняются в соответствии с методами, описанными в Приложении.
Статья 2
Государства-члены должны ввести в действие законы, постановления или административные положения, необходимые для соблюдения настоящей Директивы, не позднее 31 декабря 1983 года.
Они должны немедленно проинформировать об этом Комиссию.
Статья 3
Данная Директива адресована государствам-членам.
Совершено в Брюсселе 14 мая 1982 г.
Для Комиссии
Карл-Хайнц НАРЬЕС
Член Комиссии
ПРИЛОЖЕНИЕ I. ИДЕНТИФИКАЦИЯ ОКИСЛИТЕЛЕЙ И ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ ПЕРОКСИДА ВОДОРОДА В СРЕДСТВАХ ПО УХОДУ ЗА ВОЛОСАМИ
ЦЕЛЬ И ОБЪЕМ
Йодометрическое определение перекиси водорода в косметике возможно только при отсутствии других окислителей, образующих йод из йодидов. Следовательно, перед йодометрическим определением пероксида водорода необходимо обнаружить и идентифицировать любые другие присутствующие окислители. Эта идентификация разбивается на два этапа; первый охватывает персульфаты, броматы и перекись водорода, а второй — пероксид бария.
А. ИДЕНТИФИКАЦИЯ ПЕРСУЛЬФАТОВ, БРОМАТОВ И ПЕРОКСИДА ВОДОРОДА
1. ПРИНЦИП
Персульфат натрия, персульфат калия и персульфат аммония; Бромат калия, бромат натрия и пероксид водорода, независимо от того, являются ли они пероксидом бария или нет, идентифицируются с помощью нисходящей бумажной хроматографии с использованием двух проявляющих растворителей.
2. РЕАГЕНТЫ
Все реагенты должны быть аналитической чистоты. 2.1. 0,75 % (масс./об.) водные растворы сравнения следующих соединений: 2.1.1. Персульфат натрия
2.1.2. Персульфат калия 2.1.3. Персульфат аммония 2.1.4. Бромат калия <р> 2.1.5. Бромат натрия <р> 2.1.6. Перекись водорода
<р> 2.2. Проявляющий растворитель A, 80 % (по объему) этанол <р> 2.3. Проявляющий растворитель Б, бензол-метанол-3-метилбутан-1-ол-вода (34 : 38 : 18 : 10 по объему) <р> 2.4. Детектирующий агент А, 10 % (масс./об.) водный раствор йодида калия <р> 2.5. Детектирующий агент B, 1% (масс./об.) водный раствор крахмала <р> 2.6. Детектирующий агент C, 10 % (м/м) соляная кислота <р> 2.7. 4N соляная кислота
3. АППАРАТЫ И ОБОРУДОВАНИЕ 3.1. Хроматографическая бумага (ватман №3 и №4 или их эквиваленты)
<р> 3.2. Микропипетка, 1 ¶л <р> 3.3. Стандартные колбы, 100 мл <р> 3.4. Рифленые фильтры <р> 3.5. Аппарат для нисходящей бумажной хроматографии
4. ПОДГОТОВКА ПРОБ 4.1. Водорастворимые продукты
Приготовьте два раствора каждого образца, растворив 1 г и 5 г продукта соответственно в 100 мл воды. Используйте по 1 л каждого из этих растворов для проведения бумажной хроматографии, описанной в разделе 5.
<р> 4.2. Продукты труднорастворимые в воде 4.2.1. Отвешивают 1 г и 5 г образца и диспергируют в 50 мл воды, доводят водой до 100 мл в каждом случае и перемешивают. Отфильтруйте две дисперсии через желобчатый фильтр (3.4) и используйте по 1 л каждого из фильтратов для проведения бумажной хроматографии, описанной в разделе 5. <р> 4.2.2. Готовят еще раз две дисперсии каждой пробы, диспергируя 1 г и 5 г в 50 мл воды, подкисляют разбавленной соляной кислотой (2.7), доводят водой до 100 мл и перемешивают. Отфильтруйте дисперсии через желобчатый фильтр (3.4) и используйте по 1 л из двух фильтратов для проведения бумажной хроматографии, описанной в разделе 5.
<р> 4.3. Кремы
Дисперсируйте 5 г и 20 г каждого продукта в 100 мл воды и используйте дисперсии для проведения бумажной хроматографии, описанной в разделе 5.
5. МЕТОД 5.1. Поместите соответствующее количество растворителей А (2.2) и Б (2.3) в две отдельные хроматографические емкости для проведения нисходящей бумажной хроматографии. Насыщайте хроматографические резервуары парами растворителя в течение как минимум 24 часов.
<р> 5.2. Нанесите по 1 л раствора одной пробы и одного раствора сравнения, приготовленного в соответствии с разделами 4 и 2.1, к каждой начальной точке на полоске хроматографической бумаги (Whatman No 3 или эквивалентной) длиной 40 см и шириной 20 см (3.1) или другой подходящей бумаги. форматируют и упаривают раствор на воздухе. <р> 5.3. Поместите хроматографическую полоску (5.2) в хроматографический резервуар, наполненный проявляющим растворителем А (5.1), и проявляйте до тех пор, пока фронт растворителя не продвинется на 35 см (около 15 часов). <р> 5.4. Повторите процедуру, описанную в разделах 5.2 и 5.3, используя хроматографическую бумагу (Whatman No 4 или эквивалент) (3.1) и проявляющий растворитель B. Хроматографируйте до тех пор, пока фронт растворителя не продвинется на 35 см (около пяти часов). <р> 5.5. После проявления снимите хроматограммы и высушите их на воздухе. <р> 5.6. Выявляют пятна на хроматограмме, последовательно опрыскивая ее: 5.6.1. вскоре после этого появился детектирующий агент А (2.4) и детектирующий агент Б (2.5). Пятна персульфатов теперь появятся на хроматограмме первыми, а за ними последуют пятна перекиси водорода. Отметьте места карандашом; <р> 5.6.2. детектирующий агент С (2.6) на хроматограммах, полученных в соответствии с разделом 5.6.1; присутствие броматов теперь будет обозначаться серовато-синими пятнами на хроматограмме.
<р> 5.7. В вышеупомянутых условиях, относящихся к разработке растворителей A (2.2) и B (2.3), значения Rf эталонных веществ (2.1) примерно следующие: >PIC FILE="T0050747">
Б. ИДЕНТИФИКАЦИЯ ПЕРОКСИДА БАРИЯ
1. ПРИНЦИП
Пероксид бария идентифицируют по образованию пероксида водорода после подкисления пробы (А.4.2) и по наличию иона бария: - в отсутствие персульфатов (А) путем добавления разбавленной серной кислоты к часть кислого раствора пробы (Б.4.1), в результате чего образуется белый осадок сульфата бария. Наличие ионов бария в пробе (Б.4.1) еще раз подтверждают методом бумажной хроматографии описанным ниже способом (Б.5),
<р> - где одновременно присутствуют пероксид бария и персульфаты (Б.4.2) путем расщепления остатка раствора (Б.4.2) в щелочи; после растворения в соляной кислоте наличие ионов бария в растворе расплава (Б.4.2.3) подтверждают методом бумажной хроматографии и/или осаждением сульфатом бария.
2. РЕАГЕНТЫ 2.1. Метанол
<р> 2.2. 36 % (м/м) концентрированная соляная кислота <р> 2.3. 6N соляная кислота <р> 2.4. 4N серная кислота <р> 2.5. Динатриевая соль родизоновой кислоты <р> 2.6. Хлорид бария (BaCl2·72H2O)<р> 2.7. Безводный карбонат натрия <р> 2.8. 1 % (масс./об.) водный раствор хлорида бария <р> 2.9. Проявляющий растворитель, состоящий из метанола, концентрированной соляной кислоты (концентрация 36 %) и воды (80 : 10 : 10 по объему) <р> 2.10. Детектирующий агент, 0,71% (масс./об.) водный раствор динатриевой соли родизоновой кислоты, свежеприготовленный непосредственно перед использованием.
3. АППАРАТЫ И ОБОРУДОВАНИЕ 3.1. Микропипетка, 5 ¶л
<р> 3.2. Платиновые тигли <р> 3.3. Стандартные колбы, 100 мл <р> 3.4. Хроматографическая бумага Schleicher and Schull 2043 b или эквивалент. Очистите бумагу, проявив ее в течение ночи в резервуаре для нисходящей хроматографии (А.3.5), содержащем проявитель (В.2.9), а затем высушите. <р> 3.5. Рифленая фильтровальная бумага <р> 3.6. Обычный аппарат для проведения восходящей бумажной хроматографии
4. ПОДГОТОВКА ПРОБ 4.1. Продукция, в которой отсутствуют персульфаты 4.1.1. 2 г продукта диспергируют в 50 мл воды и доводят pH дисперсии примерно до 1 с помощью соляной кислоты (Б.2.3).
<р> 4.1.2. Перенесите дисперсию с водой в стандартную колбу вместимостью 100 мл, доведите водой до метки и перемешайте. Используйте эту дисперсию для анализа бумажной хроматографии, описанного в разделе 5, и для идентификации бария путем осаждения сульфата.
<р> 4.2. Продукты, в которых присутствуют персульфаты 4.2.1. 2 г препарата растворить в 100 мл воды и профильтровать. <р> 4.2.2. К высушенному остатку добавляют в 7-10 раз больше его массы карбоната натрия (Б.2.7), перемешивают и расплавляют смесь в платиновом тигле (Б.3.2) в течение получаса. <р> 4.2.3. Охладить до комнатной температуры, растворить расплав в 50 мл воды и профильтровать (Б.3.5)<р> 4.2.4. Остаток расплава растворяют в соляной кислоте (Б.2.3) и доводят объем воды до 100 мл. Используйте этот раствор для анализа бумажной хроматографии, описанного в разделе 5, и для идентификации бария путем осаждения сульфата.
5. МЕТОД 5.1. Поместите соответствующее количество проявляющего растворителя (В.2.9) в резервуар для восходящей бумажной хроматографии и насыщайте резервуар в течение не менее 15 часов.
<р> 5.2. На лист хроматографической бумаги, предварительно обработанной, как описано в разделе Б.3.4, наносят по 5 мкл каждого из растворов, приготовленных в соответствии с разделами Б.4.1.2 и Б.4.2.4, и раствор сравнения Б.2.8 при трех пусках. точки. <р> 5.3. Высушите образец и эталонные пятна на воздухе. Развивайте хроматограмму до тех пор, пока фронт растворителя не поднимется на 30 см. <р> 5.4. Достаньте хроматограмму из резервуара и высушите на воздухе. <р> 5.5. Выявляют пятна на хроматограмме, опрыскивая бумагу детектирующим агентом Б.2.10. В присутствии бария на хроматограмме появляются красные пятна со значением RF около 0,710.
C. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПЕРОКСИДА ВОДОРОДА
1. ПРИНЦИП
Йодометрическое определение перекиси водорода основано на следующей реакции: >PIC FILE="T0050748">
Это превращение протекает медленно, но может быть ускорено добавлением молибдата аммония. Образовавшийся йод определяют титриметрически по тиосульфату натрия и являются мерой содержания перекиси водорода.
2. ОПРЕДЕЛЕНИЕ
Содержание пероксида водорода, измеренное описанным ниже способом, выражается в процентах по массе (% масс.) продукта.
3. РЕАГЕНТЫ
Все реагенты должны быть аналитической чистоты. 3.1. 2н серная кислота
3.2. Йодид калия <р> 3.3. Молибдат аммония <р> 3.4. 0 71 N тиосульфат натрия <р> 3.5. 10 % (масс./об.) раствор йодида калия, свежеприготовленный непосредственно перед использованием <р> 3.6. 20 % (по объему) раствор молибдата аммония <р> 3.7. 1 % (м/об) раствор крахмала
4. АППАРАТЫ И ОБОРУДОВАНИЕ 4.1. Мензурки, 100 мл
<р> 4.2. Бюретка, 50 мл <р> 4.3. Стандартные колбы, 250 мл <р> 4.4. Мерные цилиндры 25 и 100 мл <р> 4.5. Пипетки с одной меткой, 10 мл <р> 4.6. Колбы конические, 250 мл
5. МЕТОД 5.1. В стакан емкостью 100 мл отвешивают 10 г (м грамм) продукта, содержащего около 0,76 г перекиси водорода. Содержимое с водой перенесите в стандартную колбу емкостью 250 мл, доведите водой до метки и перемешайте.
<р> 5.2. Отнесите пипеткой 10 мл раствора пробы (5.1) в коническую колбу вместимостью 250 мл (4.6) и добавьте последовательно 100 мл 2н серной кислоты (3.1), 20 мл раствора йодистого калия (3.5) и три капли раствора молибдата аммония ( 3.6). <р> 5.3. Немедленно титруйте образовавшийся йод 0,71 N раствором тиосульфата натрия (3.4) и непосредственно перед достижением конечной точки добавляйте несколько миллилитров раствора крахмала в качестве индикатора (3.7). Запишите расход тиосульфата натрия 0,71N (3,4) в миллилитрах (V). <р> 5.4. В порядке, описанном в разделах 5.2 и 5.3, проводят холостое определение, заменяя 10 мл раствора пробы на 10 мл воды. Запишите расход 0,71N тиосульфата натрия при холостом определении (объем мл).
6. РАСЧЕТ
Рассчитайте содержание перекиси водорода в продукте в массовых процентах (% м/м) с помощью следующей формулы: >PIC FILE="T0050749">
7. ПОВТОРЯЕМОСТЬ (1)
Для продукта, содержащего около 6 % по массе перекиси водорода, разница между результатами двух определений, параллельно проводимых на одной и той же пробе, не должна превышать абсолютное значение 0,72 %. (1) См. стандарт ISO 5725.
<р> II. ИДЕНТИФИКАЦИЯ И ПОЛУКОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ НЕКОТОРЫХ ОКИСЛЕННЫХ КРАСИТЕЛЕЙ В КРАСКАХ ДЛЯ ВОЛОС
1. ЦЕЛЬ И ОБЪЕМ
Данный метод пригоден для идентификации и полуколичественного определения следующих веществ в красках для волос в кремовой или жидкой форме: >PIC FILE="T0050750">
2. ПРИНЦИП
Окислительные красители экстрагируются при pH 10 96 % этанолом из красителей в кремовой или жидкой форме и идентифицируются методом тонкослойной хроматографии, одно- или двумерной.
Для полуколичественного определения этих веществ хроматограмму проб сравнивают с помощью четырех проявочных систем с хроматограммами эталонных веществ, произведенных в одно и то же время и в максимально близких условиях.
3. РЕАГЕНТЫ
Все реагенты должны быть аналитической чистоты. 3.1. Этанол безводный
<р> 3.2. Ацетон <р> 3.3. Этанол, 96 % по объему <р> 3.4. Раствор аммиака, 25 % (d204 = 0 791)<р> 3.5. L(+)-аскорбиновая кислота <р> 3.6. Хлороформ <р> 3.7. Циклогексан <р> 3.8. Азот технический <р> 3.9. Толуол <р> 3.10. Бензол <р> 3.11. н-бутанол <р> 3.12. Бутан-2-ол <р> 3.13. Гипофосфористая кислота, 50 % раствор по объему <р> 3.14. Диазореактив. Либо: - 3-нитро-1-бензолдиазоний хлорбензолсульфонат (стабилизированная форма соли), как в Red 2 JN - Франкол,- 2-Хлор-4-нитро-1-бензолдиазоний нафталинбензоат (стабилизированная форма соли), как в реагенте NNCD - ссылочный № 74 150 FLUKA,
или эквивалент.
<р> 3.15. Нитрат серебра <р> 3.16. п-Диметиламинобензальдегид <р> 3.17. 2,5-Диметилфенол <р> 3.18. Гексагидрат хлорида железа <р> 3.19. Соляная кислота, 10 % раствор по объему <р> 3.20. Эталонные веществаЭталонными веществами являются те, которые указаны в пункте 1 «Назначение и область применения». В случае аминных соединений эталонным веществом должен быть либо гидрохлорид (моно- или ди), либо свободное основание.
<р> 3.21. Эталонные растворы 0 75 % (масс./об.)Готовят раствор 0,75 % (масс./об.) каждого из эталонных веществ, указанных в разделе 3.20.
Отвешивают 50 мг ± 1 мг эталонного вещества в стандартную колбу емкостью 10 мл.
Добавить 5 мл 96 % этанола (3.3) и 250 мг аскорбиновой кислоты (3.5).
Подщелачивают раствор путем добавления раствора аммиака (3.4) до достижения кажущегося pH 10 (проверка с помощью индикаторной бумаги).
Доведите до 10 мл 96 % этанола (3.3) и перемешайте.
Растворы можно хранить в течение недели в прохладном, защищенном от света месте.
В некоторых случаях после добавления аскорбиновой кислоты и аммиака может образоваться осадок. Затем ему следует дать отстояться, прежде чем продолжить.
<р> 3.22. Разработка растворителей 3.22.1. Ацетон – хлороформ – толуол (35 : 25 : 40 по объему) <р> 3.22.2. Хлороформ - циклогексан - абсолютный этанол - 25 % аммиака (80 : 10 : 10 : 1 по объему) <р> 3.22.3. Бензол-бутан-2-ол-вода (50:25:25 по объему). Хорошо встряхните и используйте верхнюю фазу после отделения при комнатной температуре (20–25 °C). <р> 3.22.4. н-Бутанол – хлороформ – реагент М (7 : 70 : 23 по объему). Аккуратно отделите при комнатной температуре (20–25 °C) и используйте нижнюю фазу.
>PIC FILE="T0050751">
Примечание
Проявляющие растворители, содержащие аммиак, необходимо хорошо встряхивать непосредственно перед применением.
<р> 3.23. Индикаторные спреи 3.23.1. ДиазореактивПриготовьте 5 % (масс./об.) водный раствор выбранного реагента (3.14). Этот раствор должен быть свежеприготовленным непосредственно перед применением.
<р> 3.23.2. Реактив Эрлиха2 г п-диаметиламинобензальдегида (3.16) растворяют в 100 мл 10%-ного (масс./об.) водного раствора соляной кислоты (3.19).
<р> 3.23.3. 2,5-диметилфенол - гексагидрат хлорида железаРаствор 1: Растворите 1 г диметилфенола (3.17) в 100 мл 96% этанола (3.3).
Раствор 2: Растворите 4 г гексагидрата хлорида железа (3.18) в 100 мл 96 % этанола (3.3).
Для проявления эти растворы распыляются отдельно: сначала раствор 1, затем раствор 2.
<р> 3.23.4. Аммиачная селитра серебра25 % аммиака (3.4) добавляют к 5 % (масс./об.) водн. раствор нитрата серебра (3.15) до полного растворения осадка. Этот реагент необходимо готовить непосредственно перед использованием.
Не хранить.
4. АППАРАТ 4.1. Обычное лабораторное оборудование для тонкослойной хроматографии. 4.1.1. Пластиковая или стеклянная крышка сконструирована так, чтобы хроматографическая пластинка могла быть окружена азотом во время нанесения пятен и сушки. Эта мера предосторожности необходима из-за склонности некоторых красителей к окислению.
<р> 4.1.2. Микрошприц на 10 ¶л, градуированный с делением 0,72 ¶л, с иглой с квадратным срезом или, лучше, с повторяющимся дозатором на 50 ¶л, закрепленный на зажимной стойке таким образом, чтобы планшет можно было держать под азотом. . <р> 4.1.3. Готовые к использованию тонкослойные пластины из силикагеля толщиной 0,725 мм, размером 20 x 20 см (Macherey и Nagel, Silica G-HR, на пластиковой подставке или эквивалентные)
<р> 4.2. Центрифуга, 4 000 об./мин. <р> 4.3. Центрифужные пробирки емкостью 10 мл с завинчивающимися крышками с тефлоновым покрытием или эквивалентные
5. ПОРЯДОК 5.1. Обработка тестовых образцов
Выбросьте первые 2–3 см крема, вытекшего из тюбика.
В центрифужную пробирку (4.3), предварительно продутую азотом, поместите: 300 мг аскорбиновой кислоты с 3 г сливок или 3 г гомогенизированной жидкости.
Добавляйте по каплям 25 % аммиака (3.4) до тех пор, пока pH не станет равным 10. Доведите объем до 10 мл 96 % этанолом (3.3).
Гомогенизируют в атмосфере азота (3.8), закупоривают и затем центрифугируют при 4000 об./мин. на 10 минут.
Используйте надосадочную жидкость.
<р> 5.2. Хроматография 5.2.1. Находим тарелкиВ атмосфере азота (3.8) нанесите на хроматографическую пластинку (4.1.3) по 1 мкл каждого из вышеописанных эталонных растворов в девяти точках, расположенных на расстоянии около 1,75 см друг от друга вдоль линии примерно 1,75 см. от края тарелки.
Эти эталонные решения расположены следующим образом: >PIC FILE="T0050752">
Кроме того, нанесите в точки 10 и 11 соответственно 2 мкл образцов испытуемого раствора, полученных в соответствии с разделом 5.1.
Планшетку выдерживают под азотом (3.8) до момента хроматографии.
<р> 5.2.2. РазвитиеПоместите пластинку в резервуар, предварительно промытый азотом (3.8), насыщенный одним из четырех растворителей (3.22), и дайте проявиться при комнатной температуре (от 20 до 25 °C) в темноте до тех пор, пока фронт растворителя не исчезнет. переместился примерно на 15 см от базовой линии.
Удалите пластину и высушите в атмосфере азота (3.8) при комнатной температуре.
<р> 5.2.3. ОпрыскиваниеНемедленно опрыскайте пластину одним из четырех растворов, указанных в 3.23.
<р> 5.2.4. ИдентификацияСравните значение Rf и цвет, полученный из образца, с цветом эталонных веществ, подвергнутых хроматографии.
В таблице I в качестве примера приведены значения Rf и цвета для каждого вещества в зависимости от используемого растворителя и индикатора.
Подтверждение сомнительной идентификации иногда может быть достигнуто с помощью метода добавления соответствующего раствора эталонного вещества к экстракту образца.
<р> 5.2.5. Полуколичественная оценкаВизуально сравнивают интенсивность пятен каждого вещества, указанного в 5.2.4, с соответствующим диапазоном концентраций эталонных веществ.
Если концентрация одного или нескольких веществ, обнаруженных в образце, является чрезмерной, разбавьте экстракт образца и повторите измерение.
>PIC FILE="T0050753">
6. ИССЛЕДОВАНИЕ МЕТОДОМ ДВУМЕРНОЙ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
Эта двумерная хроматографическая процедура требует использования дополнительных стандартов и реагентов. 6.1. Дополнительные эталонные растворы и вещества 6.1.1. >PIC ФАЙЛ="T0050754">
<р> 6.1.2. 2-аминофенол (ОАП) <р> 6.1.3. 3-аминофенол (MAP) <р> 6.1.4. 4-аминофенол (ПАП) <р> 6.1.5. 2-нитро-1,4-фенилендиамин (2-НПФД) <р> 6.1.6. 4-нитро-1,2-фенилендиамин (4-НОПД)Приготовьте 0,75 % массовый раствор каждого из дополнительных эталонных веществ, как описано в 3.21.
<р> 6.2. Дополнительный проявляющий растворитель 6.2.1. Раствор этилацетат-циклогексан-аммиак, 25 % (65 : 30 : 0 75 по объему)
<р> 6.3. Дополнительная система индикации
Поместите стеклянный сосуд в проявочный резервуар для тонкослойной хроматографии, добавьте около 2 г кристаллического йода и закройте резервуар подходящей крышкой.
<р> 6.4. Хроматография 6.4.1. Нарисуйте две линии, как показано на рисунке 1, на впитывающей поверхности тонкослойной пластины (4.1.3). <р> 6.4.2. В атмосфере азота (4.1.1) нанесите от 1 до 4 л экстракта (5.1) в базовую точку 1 (рис. 1), которая находится на расстоянии 2 см с двух сторон. Количество экстракта зависит от интенсивности пятен на хроматограммах 5.2. <р> 6.4.3. Разделите между точками 2 и 3 (рисунок 1) окислительные красители, идентифицированные или предположительно идентифицированные, на 5,2 (расстояние между точками 1 75 см). Примените по 2 мкл каждого эталонного раствора, кроме DAP, из которого необходимо использовать 6 мкл. Проводят операцию в атмосфере азота (6.4.2). <р> 6.4.4. Повторяют операцию 6.4.3 в базовых точках 4 и 5 (рисунок 1) и выдерживают пластинку в атмосфере азота до момента хроматографии (расстояние между точками 1 75 см). <р> 6.4.5. Хроматографическую емкость продувают азотом (3.8) и помещают в нее необходимое количество проявляющего растворителя 3.22.2. Поместите планшет (6.4.4) в резервуар и проявите его в темноте в направлении первого элюирования (рис. 1).Элюируйте до тех пор, пока фронт растворителя не достигнет линии, отмеченной на планшете (приблизительно 13 см).
<р> 6.4.6. Выньте планшет из резервуара и поместите его в хроматографический резервуар, предварительно промытый азотом, для испарения элюирующего растворителя в течение как минимум 60 минут. <р> 6.4.7. В градуированную пробирку помещают подходящее количество элюирующего растворителя (6.2) в резервуар, продутый азотом (3.8), помещают пластинку, повернутую на 90°, в резервуар (6.4.6) и хроматографируют во втором направлении ( также в темноте) до тех пор, пока фронт растворителя не достигнет линии, нарисованной на впитывающей поверхности. Выньте планшет из резервуара и выпарите растворитель для элюирования на воздухе. <р> 6.4.8. Поместите пластинку на 10 минут в хроматографический резервуар с парами йода (6.3) и интерпретируйте двустороннюю хроматограмму, используя значения Rf и цвета эталонных веществ, хроматографируемых в то же время (таблица II дает представление о значениях Rf и цветах). ).Примечание
Для получения максимальной окраски пятен оставьте хроматограмму на воздухе на полчаса после проявления.
<р> 6.4.9. Присутствие окислительных красителей, обнаруженных в 6.4.8, можно окончательно подтвердить, повторяя операции, описанные в 6.4.1–6.4.8, и добавляя в базовой точке 1 поверх количества экстракта, указанного в 6.4.2, 1 ¶л эталонные вещества, указанные в 6.4.8. если другого пятна по сравнению с хроматограммой, полученной по 6.4.8, не обнаружено, интерпретация хроматограммы 6.4.8 правильная.
>PIC FILE="T0050755">
<р> III. ИДЕНТИФИКАЦИЯ И ОПРЕДЕЛЕНИЕ НИТРИТАА. ИДЕНТИФИКАЦИЯ
1. ЦЕЛЬ И ОБЪЕМ
Этот метод подходит для идентификации нитритов в косметических продуктах, особенно в кремах и пастах.
2. ПРИНЦИП
На наличие нитрита указывает образование окрашенных производных с >PIC FILE="T0050756">
3. РЕАГЕНТЫ
Все реагенты должны быть аналитической чистоты. 3.1. Разбавьте серную кислоту: разбавьте 2 мл концентрированной серной кислоты (d204 = 1784) 11 мл дистиллированной воды.
<р> 3.2. Разбавьте соляную кислоту: разбавьте 1 мл концентрированной соляной кислоты (d204 = 1719) 11 мл дистиллированной воды. <р> 3.3. Метанол <р> 3.4. >PIC ФАЙЛ="T0050757">Добавьте по каплям 4 мл разбавленной соляной кислоты (3.2) и встряхните. Залейте до метки метанолом и перемешивайте до полной прозрачности раствора. Хранят раствор в бутылке из коричневого стекла (4.3).
4. АППАРАТ 4.1. Мензурки, 50 мл
<р> 4.2. Стандартная колба, 100 мл <р> 4.3. Флакон из коричневого стекла, 125 мл <р> 4.4. Стеклянная тарелка, 10 х 10 см <р> 4.5. Пластиковый шпатель <р> 4.6. Фильтровальная бумага, 10 х 10 см
5. ПОРЯДОК 5.1. Часть исследуемой пробы равномерно распределяют по стеклянной пластинке (4.4) так, чтобы покрыть поверхность толщиной не более 1 см.
<р> 5.2. Замочите лист фильтровальной бумаги (4.6) в дистиллированной воде. Положите его на образец и прижмите фильтровальную бумагу пластиковым шпателем (4.5). <р> 5.3. Подождите около одной минуты и нанесите на центр фильтровальной бумаги: - две капли разбавленной серной кислоты (3.1),- >PIC FILE="T0050758">
<р> 5.4. Через 5–10 секунд снимите фильтровальную бумагу и осмотрите ее при дневном свете. На наличие нитрита указывает красновато-фиолетовая окраска.Если содержание нитритов низкое, красновато-фиолетовый цвет меняется на желтый через 5–15 секунд. Это изменение цвета происходит только через одну-две минуты при наличии большого количества нитрита.
6. КОММЕНТАРИЙ
Интенсивность красновато-фиолетового цвета и время, прошедшее до его изменения на желтый, могут указывать на содержание нитритов в образце.
Б. ОПРЕДЕЛЕНИЕ
1. ЦЕЛЬ
Метод описывает определение нитритов в косметической продукции.
2. ОПРЕДЕЛЕНИЕ
Содержание нитритов в пробе, определенное по данному методу, выражается в % от массы нитрита натрия.
3. ПРИНЦИП
После разбавления образца водой и осветления присутствующий нитрит вступает в реакцию с сульфаниламидом и N-1-нафтилэтилендиамином, а оптическую плотность полученного цвета измеряют при 538 нм.
4. РЕАГЕНТЫ
Все реагенты должны быть аналитического качества. 4.1. Реагенты для осветления: эти реагенты нельзя использовать более одной недели после приготовления. 4.1.1. Реагент Каррес I:
106 г цианоферрата калия (II) K4Fe(CN)6 · 73H2O растворяют в дистиллированной воде и доводят водой до 1 000 мл.
4.1.2. Реагент Каррез II:219 75 г ацетата цинка, Zn(CH3COO)2 · 72H2O и 30 мл ледяной уксусной кислоты растворяют в дистиллированной воде и доводят водой до 1 000 мл.
<р> 4.2. Раствор нитрита натрия:
В мерной колбе вместимостью 1 000 мл растворяют 0 7500 г нитрита натрия в дистиллированной воде и доводят водой до метки. Разбавьте 10 70 мл этого исходного стандартного раствора до 500 мл; 1 мл последнего раствора = 10 мкг NaNO2.
<р> 4.3. 1н раствор гидроксида натрия <р> 4.4. 0 72 % раствор сульфаниламида гидрохлорида:Растворить 2 70 г сульфаниламида в 800 мл воды при нагревании. Остудить и при перемешивании добавить 100 мл концентрированной соляной кислоты. Разбавить водой до 1 000 мл.
<р> 4.5. 5N соляная кислота <р> 4.6. N-1-нафтильный реагент:Этот раствор необходимо приготовить в день использования. 0,71 г N-1-нафтилэтилендиамина дигидрохлорида растворяют в воде и доводят водой до 100 мл.
5. АППАРАТ 5.1. Аналитический баланс
<р> 5.2. Колбы мерные 100, 250, 500 и 1 000 мл<р> 5.3. Пипетки с грушей или градуировкой <р> 5.4. Мерные цилиндры 100 мл <р> 5.5. Рифленая фильтровальная бумага, без нитритов, диаметр 15 см <р> 5.6. Водяная баня <р> 5.7. Спектрофотометр с оптическими кюветами длиной оптического пути 1 см <р> 5.8. pH-метр <р> 5.9. Микробюретка 10 мл <р> 5.10. Стаканчики 250 мл
6. ПОРЯДОК 6.1. Гомогенизированную пробу взвешивают массой около 0,75 г (м грамм) с точностью до 0,71 мг, количественно переносят с горячей дистиллированной водой в химический стакан вместимостью 250 мл (5.10) и доводят объем горячей дистиллированной водой примерно до 150 мл. Поместите стакан (5.10) на водяную баню (5.6) при температуре 80 °С на полчаса. В этот период время от времени встряхивайте содержимое.
<р> 6.2. Остудить до комнатной температуры и добавить последовательно при перемешивании 2 мл реактива Каррез I (4.1.1) и 2 мл реактива Каррез II (4.1.2). <р> 6.3. Добавьте 1 н. раствор гидроксида натрия (4.3), чтобы довести pH до 8–73. (Используйте pH-метр (5.8)). Содержимое количественно переносят в мерную колбу вместимостью 250 мл (5.2) и доводят до метки дистиллированной водой. <р> 6.4. Перемешайте содержимое и отфильтруйте через рифленый бумажный фильтр (5.5). <р> 6.5. Отнесите пипеткой (5.3) подходящую аликвоту (V мл) прозрачного фильтрата, но не более 25 мл, в мерную колбу вместимостью 100 мл (5.2) и добавьте дистиллированную воду до объема 60 мл. <р> 6.6. После перемешивания добавляют 10,0 мл раствора сульфаниламида гидрохлорида (4.4), а затем 6–70 мл 5 н. соляной кислоты (4.5). Перемешайте и дайте постоять пять минут. Добавляют 2 70 мл N-1-нафтилового реагента (4.6), перемешивают и дают постоять три минуты. Разбавьте водой до метки и перемешайте. <р> 6.7. Подготовьте холостой тест, повторив операции 6.5 и 6.6 без добавления N-1-нафтилового реагента (4.6). <р> 6.8. Измерьте (5.7) оптическую плотность раствора, полученного в соответствии с 6.6, при длине волны 538 нм, используя в качестве эталона контрольный раствор (6.7). <р> 6.9. По градуировочному графику (6.10) читают содержание нитрита натрия в микрограммах на 100 мл раствора (м1 микрограмм), соответствующее оптической плотности, измеренной в 6.8. <р> 6.10. Используя раствор нитрита натрия концентрацией 10 мкг/мл (4.2), строят калибровочный график для концентраций 0, 20, 40, 60, 80, 100 мкг нитрита натрия на 100 мл.
7. РАСЧЕТ
Рассчитайте содержание нитрита натрия в образце в процентах по массе с помощью следующей формулы: >PIC FILE="T0050759">
8. ПОВТОРЯЕМОСТЬ (1)
При содержании нитрита натрия около 0,72 % по массе разница между результатами двух определений, параллельно проводимых на одной и той же пробе, не должна превышать абсолютное значение 0,005 %.
<р> IV. ИДЕНТИФИКАЦИЯ И ОПРЕДЕЛЕНИЕ СВОБОДНОГО ФОРМАЛЬДЕГИДА
1. ЦЕЛЬ И ОБЪЕМ
Этот метод описывает идентификацию и определение свободного формальдегида. Он применим ко всем косметическим продуктам и состоит из трех частей: 1.1. Идентификация
<р> 1.2. Определение пентан-2,4-дион колориметриейЭтот метод неадекватен, когда формальдегид соединяется или полимеризуется, как в случае с донорами формальдегида. Если результат превышает максимально допустимую концентрацию, необходимо использовать следующий метод.
<р> 1.3. Определение с бисульфитомПри этом методе не учитывается формальдегид в большинстве комбинированных или полимерных соединений. Однако определяются некоторые нестабильные соединения (например, гексаметилентетрамин). Более того, измерение щелочности затруднено в присутствии буферного раствора.
2. ОПРЕДЕЛЕНИЕ
Содержание свободного формальдегида в образце, определенное данным методом, выражается в процентах по массе.
3. ПРИНЦИП 3.1. Часть I. Идентификация
Формальдегид в среде серной кислоты придает реактиву Шиффа розовый или лиловый цвет.
<р> 3.2. Часть II – Определение по пентан-2,4-дионуФормальдегид реагирует с пентан-2,4-дионом в присутствии ацетата аммония с образованием 3,5-диацетил-1,4-дигидролутидина. Его экстрагируют бутан-1-олом и измеряют поглощение экстракта при 410 нм. (1) См. стандарт ISO 5725.
<р> 3.3. Часть III – Определение с бисульфитомФормальдегид реагирует с сульфитом в кислой среде при 0 °C с образованием присоединения. Избыточные протоны титруют гидроксидом натрия. Потребленные протоны составляют основу расчета для определения количества формальдегида. Холостой тест без сульфита позволяет измерить щелочность или кислотность среды.
4. РЕАГЕНТЫ
Все реагенты должны быть аналитической чистоты. 4.1. Ледяная уксусная кислота
<р> 4.2. Безводный ацетат аммония <р> 4.3. Бутан-1-ол <р> 4.4. Серная кислота, около 2Н <р> 4.5. Свежеприготовленный 0 71 М раствор сульфита натрия<р> 4.6. Реагент Шиффа 100 мг фуксина отвешивают в стакан и растворяют в 75 мл воды при температуре 80°С.После охлаждения добавить 2 75 г гептагидрата сульфита натрия (Na2SO3 · 77H2O) и 1 75 мл концентрированной соляной кислоты (d204 = 1 719). Довести объем до 100 мл.
(Этот реагент непригоден для использования через две недели.)
<р> 4.7. Реагент пентан-2,4-дионВ мерной колбе вместимостью 1 000 мл растворяют: >PIC FILE="T0050760">
Доведите до 1 000 мл водой (рН раствора: около 6,74)
Этот реагент должен быть свежеприготовленным.
<р> 4.8. Стандартный раствор серной кислоты, 0 71N <р> 4.9. Стандартный раствор гидроксида натрия, 0 71N <р> 4.10. Раствор йода, 0 71Н <р> 4.11. Тиосульфат натрия, 0 71Н <р> 4.12. Маточный раствор формальдегидаВ мерную колбу вместимостью 1 000 мл наливают 5 г 37–40 % раствора формальдегида и доводят объем до 1 000 мл.
Определите крепость этого раствора следующим образом: Отберите 10 700 мл; добавляют 25 700 мл стандартного 0,71 н раствора йода (4.10) и 10 мл 1 н раствора гидроксида натрия.
Дайте постоять пять минут.
Добавляют 11 мл 1 н. HCl и титруют избыток стандартного 0,71 н раствора йода (4.10) стандартным 0,71 н раствором тиосульфата натрия (4.11), используя в качестве индикатора раствор крахмала.
1 мл 0,71N раствора йода (4.10) эквивалентен 1,75 мг формальдегида.
<р> 4.13. Эталонный раствор формальдегидаОтнесите пипеткой 5 700 мл исходного раствора (4.12) в градуированную колбу вместимостью 100 мл и доведите объем до 100 мл деминерализованной водой.
Отнесите пипеткой 5 700 мл вышеуказанного раствора в градуированную колбу вместимостью 500 мл и долейте до 500 мл деминерализованной водой.
В 1 мл этого раствора содержится около 1 мкг формальдегида.
Рассчитайте точное содержание.
<р> 4.14. Раствор тимолфталеина, 0,71 г/100 мл 50 % этанола<р> 4.15. Раствор эталонного реагента: как реагент 4.7, но без пентан-2,4-диона
5. АППАРАТ 5.1. Стандартный лабораторный аппарат
<р> 5.2. Фазоразделительный фильтр Whatman 1 PS (или аналогичный) <р> 5.3. Центрифуга <р> 5.4. Спектрофометр <р> 5.5. Стеклянные кюветы с оптическим путем 1 см<р> 5.6. Потенциометр с самописцем <р> 5.7. Стеклянные/каломельные электроды (рекомендуется использовать специальные низкотемпературные электроды).
6. ПОРЯДОК 6.1. Идентификация 6.1.1. Взвесьте 2 г испытуемого образца в стакан емкостью 10 мл.
<р> 6.1.2. Прибавляют две капли 2н серной кислоты (4.4) и 2 мл реактива Шиффа (4.6) (при применении этот реактив должен быть абсолютно бесцветным).Встряхните и оставьте на пять минут.
<р> 6.1.3. Если в течение пяти минут наблюдается розовый или лиловый оттенок, то содержание формальдегида превышает 0,701 % и его определяют по методике 6.2 и, при необходимости, по методике 6.3.
<р> 6.2. Определение пентан-2,4-дион-колориметрическим методом 6.2.1. Пример решения 6.2.1.1. В мерную колбу вместимостью 100 мл взвешивают с точностью до 0,7001 г количество (m в граммах) испытуемого образца, соответствующее предполагаемому количеству формальдегида, равному примерно 150 микрограммам. <р> 6.2.1.2. Доведите до 100 мл деминерализованной водой и перемешайте. <р> 6.2.1.3. В колбу Эрленмейера емкостью 50 мл добавьте:
10 700 мл раствора из 6.2.1.2, 5 700 мл реагента пентан-2,4-диона (4.7), деминерализованной воды до конечного объема 30 мл.
<р> 6.2.2. Эталонное решение
Возможные помехи из-за цвета фона в тестируемом образце устраняются использованием этого эталонного раствора.
В колбу Эрленмейера емкостью 50 мл добавьте:
10 700 мл раствора из 6.2.1.2, 5 700 мл раствора эталонного реагента (4.15), деминерализованной воды до конечного объема 30 мл.
<р> 6.2.3. Пустое решениеВ колбу Эрленмейера емкостью 50 мл добавьте:
5 700 мл реагента пентан-2,4-диона (4.7), деминерализованной воды до конечного объема 30 мл.
<р> 6.2.4. Определение 6.2.4.1. Колбы по 6.2.1.3, 6.2.2 и 6.2.3 встряхивают и погружают на водяную баню при температуре 60 °С ровно на 10 мин. Дайте остыть в течение двух минут в ванне с ледяной водой. <р> 6.2.4.2. Переносят в делительные воронки емкостью 50 мл, содержащие 10700 мл бутан-1-ола (4.3). Промойте каждую колбу 3–5 мл воды и добавьте промывную жидкость в воронки. Энергично встряхивайте смесь ровно 30 секунд. Позвольте ему отделиться. <р> 6.2.4.3. Фильтрация в измерительные ячейки через фазоразделительный фильтр. Центрифугирование (5 000 об/мин в течение пяти минут) менее практично и занимает больше времени. <р> 6.2.4.4. Измеряют оптическую плотность А1 при 410 нм экстракта раствора образца из 6.2.1.3 против экстракта эталонного раствора 6.2.2. <р> 6.2.4.5. Аналогичным образом измерьте экстракт контрольного раствора из 6.2.3 относительно бутан-1-ола (А2).Примечание
Все эти операции необходимо провести в течение 25 минут с момента помещения колб Эрленмейера на водяную баню с температурой 60 °С
<р> 6.2.5. Калибровочная кривая 6.2.5.1. В колбу Эрленмейера емкостью 50 мл поместите:
5 700 мл стандартного раствора (4.13), 5 700 мл реагента пентан-2,4-диона (4.7), деминерализованной воды до конечного объема 30 мл.
<р> 6.2.5.2. Продолжайте, как описано в разделе 6.2.4.5, измерьте оптическую плотность относительно бутан-1-ола (4.3). <р> 6.2.5.3. Повторите процедуру с 10, 15, 20 и 25 мл стандартного раствора. <р> 6.2.5.4. Чтобы получить нулевое значение, действуйте, как в 6.2.4.5. <р> 6.2.5.5. Постройте калибровочную кривую после вычитания нулевого значения (6.2.4.5) из каждой оптической плотности, полученной в 6.2.5.2 и 6.2.5.3. Закон Берса действителен до 30 г формальдегида.
<р> 6.3. Определение с бисульфитом 6.3.1. Подготовка пробы для испытаний 6.3.1.1. Для теста
В тарированный стакан взвешивают с точностью до 0,7001 г количество испытуемого образца (млн граммов), соответствующее предполагаемому количеству формальдегида от 3 до 20 мг.
<р> 6.3.1.2. Для эталонного тестаАналогичным образом взвесьте контрольный образец (м грамм).
<р> 6.3.2. Определение 6.3.2.1. Поместите 50 700 мл 0,71 М сульфита натрия (4.5) в химический стакан вместимостью 100 мл и добавьте 10 700 мл 0,71 М серной кислоты (4.8). Встряхните. <р> 6.3.2.2. Погрузите стакан в смесь льда и соли с целью поддержания температуры всей смеси на уровне +2 °С. Залить образец для испытаний 6.3.1.1. <р> 6.3.2.3. Быстро титровать потенциометрически 0,71 N гидроксидом натрия (4.9), непрерывно встряхивая и поддерживая температуру от +2 до +4 °C (нейтральная точка находится между pH 9 и 11). Пусть V1 — взятый объем 0,71N гидроксида натрия (4.9).
<р> 6.3.3. Пустой тест <р>Нитратируют дополнительно приготовленный раствор по 6.3.2.1 в условиях, описанных в 6.3.2.
Пусть V2 — взятый объем 0 71N гидроксида натрия (4.9).
<р> 6.3.4. Справочный тестОпределите кислотность или щелочность пробы потенциометрическим титрованием 0,71N гидроксидом натрия (4.9) или 0,71N серной кислотой (4.8) в испытуемом образце m'. Пусть v' — объем взятого 0,71 н. гидроксида натрия или 0,71 н. серной кислоты.
<р> 6.3.5. ПримечанияВажно строгое соблюдение условий испытаний.
Определение можно проводить в присутствии тимолфталеина (4.14) в качестве индикатора.
<р>7. ПРЕДСТАВЛЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ 7.1. Расчет колориметрическим методом 7.1.1. Вычтите А2 из А1 и по калибровочной кривой (6.2.5.5) определите количество С, в микрограммах, формальдегида в испытуемом растворе (6.2.1.3). <р> 7.1.2. Рассчитайте содержание формальдегида в образце в массовых процентах (% м/м) с помощью следующей формулы: >PIC FILE="T0050761">
<р> 7.2. Расчет по методу бисульфитного титрования
Отнесите объем 0,71N гидроксида натрия (4.9) или 0,71N серной кислоты (4.8), взятых в эталонном испытании, к массе m: >PIC FILE="T0050762">
Для нейтрального продукта v, конечно, равно нулю. 7.2.1. В случае кислотного продукта: >PIC FILE="T0050763">
<р>7.2.2. В случае щелочного продукта: >PIC FILE="T0050764">
<р> 7.3. Примечание
Если результаты двух методов различаются, следует брать только нижнее значение.
8. ПОВТОРЯЕМОСТЬ (1)
При содержании формальдегида 0,72 % разница между результатами двух определений, параллельно проводимых на одной и той же пробе, не должна превышать 0,7005 % для колориметрического метода и 0,705 % для бисульфитного метода. (1) См. стандарт ISO 5725.
V. ОПРЕДЕЛЕНИЕ РЕЗОРЦИНОЛА В ШАМПУНЯХ И ЛОСЬОНАХ ДЛЯ ВОЛОС
1. ЦЕЛЬ И ОБЪЕМ
Данный метод предусматривает газохроматографическое определение резорцина в шампунях и лосьонах для волос. Метод пригоден для концентраций от 0,71 до 2,70% по массе в образце.
2. ОПРЕДЕЛЕНИЕ
Содержание резорцина в образце, определенное данным методом, выражается в процентах по массе.
3. ПРИНЦИП
Резорцин и 3,5-дигидрокситолуол (5-метилрезорцин), добавленные в качестве внутреннего стандарта, отделяют от образца методом тонкослойной хроматографии. Оба соединения выделяют соскабливанием их пятен с тонкослойной пластинки и экстрагированием метанолом. Наконец, экстрагированные соединения сушат, силилируют и определяют газовой хроматографией.
4. РЕАГЕНТЫ
Все реагенты должны быть аналитической чистоты. 4.1. Соляная кислота 25 % (м/м)
<р> 4.2. Метанол <р> 4.3. Этанол 96 % (об./об.) <р> 4.4. Готовые листы силикагеля для ТСХ (пластик или алюминий) с флуоресцентным индикатором. Деактивируйте следующим образом: опрыскайте обычные листы кварца с предварительно нанесенным покрытием водой до тех пор, пока они не станут блестящими. Дайте напыленным пластинам высохнуть на воздухе при комнатной температуре в течение одного-трех часов.Примечание
Если пластины не дезактивированы, потери резорцина могут произойти за счет необратимой адсорбции на кремнеземе.
<р> 4.5. Развивающий растворитель ; ацетон-хлороформ-уксусная кислота (20:75:5 по объему). <р> 4.6. стандартный раствор резорцина; 400 мг резорцина растворяют в 100 мл 96 % этанола (4.3) (1 мл соответствует 4000 мкг резорцина). <р> 4.7. Внутренний стандартный раствор; 400 мг 3,5-дигидрокситолуола (ДГТ) растворяют в 100 мл 96 % этанола (4.3) (1 мл соответствует 4000 мкг ДГТ). <р> 4.8. Стандартная смесь; 10 мл раствора 4.6 и 10 мл раствора 4.7 смешать в мерной колбе вместимостью 100 мл, довести до метки 96 % этанолом (4.3) и перемешать (1 мл соответствует 400 мкг резорцина и 400 мкг ДГТ).4.9 Силилирующие средства: 4.9.1. N,O-бис-(триметилсилил)трифторацетамид (BSTFA)
<р> 4.9.2. Гексаметилдисилазан (ГМДС) <р> 4.9.3. Триметилхлорсилан (TMCS)
5. АППАРАТ 5.1. Обычное оборудование для тонкослойной и газовой хроматографии
<р> 5.2. Стеклянная посуда
6. ПОРЯДОК 6.1. Подготовка пробы 6.1.1. Точно взвесьте в стакан объемом 150 мл тестовую порцию (млн граммов) продукта, которая содержит примерно от 20 до 50 мг резорцина.
<р> 6.1.2. Подкисляют соляной кислотой (4.1) до тех пор, пока смесь не станет кислой (необходимо примерно 2–4 мл), добавляют 10 мл (40 мг ДГТ) раствора внутреннего стандарта (4.7) и перемешивают. Переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл с этанолом (4.3), доводят до метки этанолом и перемешивают. <р> 6.1.3. Нанесите 250 мкл раствора (6.1.2) на лист дезактивированного диоксида кремния (4.4) непрерывной линией длиной примерно 8 см. Позаботьтесь о том, чтобы линия была как можно уже. <р> 6.1.4. Нанесите 250 мкл стандартной смеси (4.8) на ту же пластинку таким же образом (6.1.3). <р> 6.1.5. Нанесите в двух точках стартовой линии по 5 мкл каждого из растворов 4.6 и 4.7 для облегчения локализации после развития пластины. <р> 6.1.6. Проявите пластину в необлицованном (ненасыщенном) резервуаре, наполненном проявляющим растворителем 4.5, до тех пор, пока фронт растворителя не достигнет линии, находящейся на расстоянии 12 см от стартовой линии; обычно это занимает около 45 минут. Высушите пластину на воздухе и локализуйте зону резорцина/ДГТ под коротковолновым УФ-светом (254 нм). Оба соединения имеют примерно одинаковые значения Rf. Отметьте полосы карандашом на расстоянии 2 мм от внешней темной границы полос. Удалите эти зоны и соберите адсорбент каждой полосы во флакон емкостью 10 мл. <р> 6.1.7. Извлеките адсорбент, содержащий образец, и абсорбент, содержащий стандартную смесь, следующим образом:добавляют 2 мл метанола (4.2) и экстрагируют в течение одного часа при непрерывном перемешивании. Отфильтруйте смесь и повторите экстракцию в течение еще 15 минут 2 мл метанола.
<р> 6.1.8. Объедините экстракты и выпарите растворитель, высушивая в течение ночи в вакуумном эксикаторе, наполненном подходящим влагопоглотителем. Не применяйте тепло. <р> 6.1.9. Силилируют остатки (6.1.8), как указано в 6.1.9.1 или 6.1.9.2. 6.1.9.1. Добавьте 200 мкл BSTFA (4.9.1) с помощью микрошприца и оставьте смесь в закрытом сосуде на 12 часов при комнатной температуре. <р> 6.1.9.2. Добавьте последовательно 200 мкл HMDS (4.9.2) и 100 мкл TMCS (4.9.3) с помощью микрошприца и нагревайте смесь в течение 30 минут при 60 °С в закрытом сосуде. Охладите смесь.
<р> 6.2. Газовая хроматография 6.2.1. Хроматографические условия
Столбец должен давать разрешение R, равное или выше 1 75, где: >PIC FILE="T0050765">
Подходящими оказались следующие условия колоночной и газовой хроматографии: >PIC FILE="T0050766">
Для настройки расхода водорода и воздуха следуйте инструкциям производителя.
<р> 6.2.2. Вводят от 1 до 3 мкл растворов, полученных по 6.1.9, в газовый хроматограф. Выполните пять инъекций каждого раствора (6.1.9), измерьте площади пиков, усредните их и рассчитайте отношение площадей пиков: S = площадь пика резорцина/площадь пика DHT.
7. РАСЧЕТ
Концентрация резорцина в образце, выраженная в % по массе (% м/м), определяется по формуле: >PIC FILE="T0050767">
8. ПОВТОРЯЕМОСТЬ (1)
При содержании резорцина около 0,75 % разница между результатами двух определений, параллельно проводимых на одной и той же пробе, не должна превышать абсолютное значение 0,7025 %.
<р> VI. ОПРЕДЕЛЕНИЕ МЕТАНОЛА ПО ОТНОШЕНИЮ К ЭТАНОЛУ ИЛИ ПРОПАН-2-ОЛ
1. ЦЕЛЬ И ОБЪЕМ
Данный метод описывает газохроматографический анализ метанола во всех видах косметической продукции (в том числе в аэрозолях).
Могут быть определены относительные уровни от 0 до 10 %.
2. ОПРЕДЕЛЕНИЕ
Содержание метанола, определенное по этому методу, выражается в % по массе метанола по отношению к этанолу или пропан-2-олу.
3. ПРИНЦИП
Определение проводят методом газовой хроматографии. (1) См. стандарт ISO 5725.
4. РЕАГЕНТЫ
Используйте реагенты аналитической степени чистоты. 4.1. Метанол
<р> 4.2. Этанол абсолютный <р> 4.3. Пропан-2-ол <р> 4.4. Хлороформ, освобожденный от спиртов промыванием водой
5. АППАРАТ 5.1. Газовый хроматограф:
с детектором катарометра для проб аэрозолей,
с пламенно-ионизационным детектором для неаэрозольных проб.
<р> 5.2. Колбы мерные, 100 мл<р> 5.3. Пипетки, 2 мл, 20 мл, от 0 до 1 мл <р> 5.4. Микрошприцы от 0 до 100 л и от 0 до 5 ли (только для проб аэрозоля) специальный газонепроницаемый шприц с шиберным клапаном (см. процедуру отбора проб Рисунок 5 (1).
6. ПОРЯДОК 6.1. Подготовка проб 6.1.1. Пробы аэрозольных продуктов отбираются в соответствии с Главой II Приложения к Директиве Комиссии 80/1335/EEC от 22 декабря 1980 г. (1), а затем анализируются методом газовой хроматографии в условиях 6.2.1.
<р> 6.1.2. Пробы неаэрозольных продуктов, отобранные в соответствии с вышеуказанной главой II, разбавляют водой до уровня этанола или пропан-2-ола от 1 до 2 %, а затем анализируют методом газовой хроматографии в условиях 6.2.2.
<р> 6.2. Газовая хроматография 6.2.1. Для проб аэрозоля используется детектор-катарометр. 6.2.1.1. Колонка заполнена 10 % Hallcomid M18 на Chromosorb WAW от 100 до 200 меш. <р> 6.2.1.2. Столбец должен давать разрешение R, равное или выше 1 75, где: >PIC FILE="T0050768"> <р> 6.2.1.3. Следующие условия позволяют достичь такого разрешения: >PIC FILE="T0050769"> (1) ОЖ № L 383, 31.12.1980, с. 27. >PIC FILE="T0050770">
<р> 6.2.2. Для неаэрозольных проб: 6.2.2.1. Колонка заполняется Chromosorb 105 или Porapak QS и используется пламенно-ионизационный детектор. <р> 6.2.2.2. Столбец должен давать разрешение R, равное или выше 1 75, где: >PIC FILE="T0050771"> <р> 6.2.2.3. Это разрешение было достигнуто с использованием следующих условий: >PIC FILE="T0050772">
7. СТАНДАРТНЫЙ ГРАФИК 7.1. Для процедуры газовой хроматографии 6.2.1 (колонка Hallcomid M18) используют следующие стандартные смеси. Приготовьте эти смеси, отмеряя пипетками, но определите точное количество путем немедленного взвешивания пипетки или колбы после каждого добавления. >PIC ФАЙЛ="T0050773">
Вводят в хроматограф от 2 до 3 мкл, соблюдая условия 6.2.1.
Рассчитайте соотношение площадей пиков (метанол/этанол) или (метанол/пропан-2-ол) каждой смеси. Постройте стандартный график, используя:
Ось X: % метанола по отношению к этанолу или пропан-2-олу,
Ось Y: соотношение площадей пиков (метанол/этанол) или (метанол/пропан-2-ол).
<р> 7.2. Для процедуры газовой хроматографии 6.2.2 (Porapak QS или Chromosorb 105) используйте следующие стандартные смеси. Приготовьте эти смеси, отмерив микрошприцем и пипеткой, но определите точное количество путем немедленного взвешивания пипетки или колбы после каждого добавления. >PIC ФАЙЛ="T0050774">Вводят в хроматограф от 2 до 3 мкл, соблюдая условия 6.2.2.
Рассчитайте соотношение площадей пиков (метанол/этанол) или (метанол/пропан-2-ол) каждой смеси. Постройте стандартный график, используя:
Ось X: % метанола по отношению к этанолу или пропан-2-олу,
Ось Y: соотношение площадей пиков (метанол/этанол) или (метанол/пропан-2-ол).
<р> 7.3. Стандартный график должен представлять собой прямую линию.
8. ПОВТОРЯЕМОСТЬ (1)
При содержании метанола 5 % относительно этанола или пропан-2-ола разница между результатами двух определений, параллельно проводимых на одной и той же пробе, не должна превышать 0,725 %. (1) См. стандарт ISO 5725.
Директивы по годам
- 2024
- 2023
- 2022
- 2021
- 2020
- 2019
- 2018
- 2017
- 2016
- 2015
- 2014
- 2013
- 2012
- 2011
- 2010
- 2009
- 2008
- 2007
- 2006
- 2005
- 2004
- 2003
- 2002
- 2001
- 2000
- 1999
- 1998
- 1997
- 1996
- 1995
- 1994
- 1993
- 1992
- 1991
- 1990
- 1989
- 1988
- 1987
- 1986
- 1985
- 1984
- 1983
- 1982
- 1981
- 1980
- 1979
- 1978
- 1977
- 1976
- 1975
- 1974
- 1973
- 1972
- 1971
- 1970
- 1969
- 1968
- 1967
- 1966
- 1965
- 1964
- 1963
- 1962
- 1961
- 1960
- 1959