Директива Комиссии 84/319/ЕЕС от 7 июня 1984 г., вносящая поправки в Приложения к Директиве Совета 77/96/ЕЕС о проверке на наличие трихинеллы (trichinella спиральис) при импорте из третьих стран свежего мяса, полученного от домашних свиней.

*****

ДИРЕКТИВА КОМИССИИ

от 7 июня 1984 г.

внесение изменений в Приложения к Директиве Совета 77/96/ЕЕС о проверке на трихинеллу (trichinella спиральис) при импорте из третьих стран свежего мяса, полученного от домашних свиней

(84/319/ЕЕС)

КОМИССИЯ ЕВРОПЕЙСКОЙ

СООБЩЕСТВА,

Принимая во внимание Договор о создании Европейского экономического сообщества,

Принимая во внимание Директиву Совета 77/96/ЕЕС от 21 декабря 1976 г. о проверке трихинеллы (trichinella спиральис) при импорте из третьих стран свежего мяса, полученного от домашних свиней (1), с последними поправками, внесенными Директивой 83/91/ЕЕС ( 2), и в частности статью 8,

Принимая во внимание, что недавние исследования позволили разработать определенные методы обнаружения трихин в свинине; поскольку надежность этих методов с точки зрения охраны здоровья эквивалентна надежности существующих методов; поскольку, следовательно, следует внести соответствующие дополнения в Приложение I к Директиве 77/96/EEC;

Принимая во внимание, что для облегчения работы по экспертизе трихинеллы странам, не являющимся членами, и государствам-членам должно быть разрешено выбирать между предусмотренными методами экспертизы;

Принимая во внимание, что необходимо внести определенные технические изменения в методы исследования трихинелл, применяемые в настоящее время, и в отношении условий, которым должны соответствовать лаборатории, занимающиеся обнаружением трихинелл;

Поскольку меры, предусмотренные настоящей Директивой, соответствуют мнению Постоянного Ветеринарного Комитета,

ПРИНЯЛ НАСТОЯЩУЮ ДИРЕКТИВУ:

Статья 1

В Директиву 77/96/EEC настоящим вносятся поправки, изложенные в Приложении.

Статья 2

Государства-члены ЕС должны ввести в действие законы, правила и административные положения, необходимые для соблюдения настоящей Директивы, не позднее 1 января 1985 г. Они должны немедленно проинформировать об этом Комиссию.

Статья 3

Данная Директива адресована государствам-членам.

Совершено в Брюсселе 7 июня 1984 года.

Для Комиссии

Пол ДАЛСАГЕР

Член Комиссии

(1) ОЖ № L 26, 31. 1. 1977, с. 67.

(2) ОЖ № L 59, 5.3.1983, с. 3. 4.

ПРИЛОЖЕНИЕ

А. В Приложение I настоящим вносятся следующие поправки:

1. В пункте II (а):

- абзац 10 заменить следующим:

«- стереомикроскоп (увеличение от 15 до 40×) с подходящим источником света»,

- последний отступ заменяется следующим:

'- пищеварительная жидкость, составленная следующим образом:

10 г пепсина (80 ед/г FIP: Международная фармацевтическая федерация), 5 мл HCl (не менее 37 %), доводят до литра водопроводной водой.

2. Пункт III заменить следующим:

'III. МЕТОД С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ИСКУССТВЕННОГО РАЗВАЖЕНИЯ КОЛЛЕКТИВНЫХ ОБРАЗЦОВ

(а) Аппаратура и реагенты

- нож и пинцет для сбора образцов,

- мясорубка с перфорацией диаметром от 2 до 3 мм,

- колба Эрленмейера емкостью 3 л с резиновой или ватной пробкой,

- коническая делительная воронка емкостью 2 000 мл,

- обычная подставка А-образной формы длиной примерно 28 см с ножкой 80 см,

- кольцо диаметром примерно 10-11 см, которое можно закрепить на подставке,

- струбцина с плоскими тисками (23×40 мм), крепящаяся к стойке с помощью двойной муфты,

- сито (размер ячеек 177 микрон) внешним диаметром 11 см, снабженное сеткой из латуни или нержавеющей стали,

- воронка внутренним диаметром не менее 12 см,

- стеклянные мерные цилиндры емкостью 100 мл,

- стереомикроскоп (увеличение от 15 до 40×) с подходящим источником света или трихиноскоп с горизонтальным столом для компрессора с подходящим источником света,

- при использовании трихиноскопа: используется тазик для подсчета личинок, который можно описать следующим образом:

счетный бассейн для личинок изготовлен из акриловых пластин толщиной 3 мм следующим образом:

(i) дно бассейна должно быть размером 180 × 40 мм, размеченным на квадраты,

(ii) стороны должны быть 230 × 20 мм,

(iii) размер конца должен быть 40 × 20 мм. Дно и концы следует вставить между бортиками, образовав таким образом таз с двумя небольшими ручками на обоих концах. Верхняя сторона днища должна быть приподнята на 7–9 мм от основания рамы, образованной бортами и торцами. Детали следует фиксировать с помощью клея, соответствующего материалу.

- несколько чашек Петри диаметром 9 см (при использовании стереомикроскопа), на нижней стороне которых с помощью заостренного инструмента размечены квадратные области исследования размером 10 × 10 мм,

- несколько 10-литровых баков, которые будут использоваться при обеззараживании аппарата, например обработке формалем, и для оставшегося пищеварительного сока в случае положительных результатов,

- концентрированная (37 %) соляная кислота,

- концентрация пепсина: 1: 10 000 NF (Национальный формуляр США)

соответствует 1:12 500 BP (Британская Фармакопея)

соответствует 2000 FIP (Международная фармацевтическая федерация),

- несколько лотков, вмещающих 50 образцов массой примерно 2 г каждый,

- весы с точностью до 0,1 г. (б) Сбор образцов

1. В случае целых туш отбирают пробу массой примерно 2 г от столба диафрагмы в месте перехода к жилистой части. При отсутствии столбов диафрагмы образец того же размера берут из реберной части грудинной части диафрагмы, из язычной или челюстной мышцы или мышц живота.

2. Для кусков мяса необходимо отобрать образец скелетных мышц массой примерно 2 г, содержащий мало жира и, по возможности, расположенный вблизи костей или сухожилий.

(в) Метод

1. (i) Полные пулы (100 образцов за раз)

От каждой из 100 отдельных проб от свиней берут примерно 1 г пробы. Объединенный образец один раз пропускают через мясорубку.

Мясной фарш помещают в 3-литровую колбу Эрленмейера вместе с 7 г пепсина, примерно 2 л водопроводной воды, нагретой примерно до 40–41°С, и 25 мл концентрированной соляной кислоты. Смесь встряхивают, чтобы растворить пепсин.

pH раствора будет примерно от 1,5 до 2.

- Для разложения колбу Эрленмейера инкубируют при температуре от 40 до 41 °C в течение примерно четырех часов. Во время инкубации колбу необходимо регулярно встряхивать, не реже двух раз в час.

- Переваренный раствор фильтруют через сито в коническую 2-литровую делительную воронку и оставляют на подставке не менее чем на один час.

- Общий объем около 45 мл следует перелить в мерный цилиндр и разделить на три чашки Петри, дно которых размечено на квадраты, по 15 мл в каждой чашке.

- Каждую чашку Петри необходимо тщательно исследовать на наличие личинок трихин под стереомикроскопом.

- Если используются резервуары для подсчета личинок, 45 мл должны быть распределены между двумя резервуарами для подсчета личинок и исследованы под трихиноскопом.

Личинки появляются в отложениях как идентифицируемые организмы, и часто, когда вода чуть теплая, можно наблюдать раскачивание и раскручивание «спирали».

- Дайджесты должны быть проверены, как только они будут готовы. Ни при каких обстоятельствах нельзя откладывать обследование на следующий день.

Если дайджесты неясны или не исследованы в течение 30 минут после их приготовления, их следует уточнить следующим образом. Итоговую пробу объемом 45 мл переливают в мерный цилиндр и оставляют на 10 минут. По истечении этого времени 30 мл надосадочной жидкости удаляют отсасыванием, а оставшиеся 15 мл доводят до 45 мл водопроводной водой. После дополнительного периода отстаивания в течение 10 минут 30 мл надосадочной жидкости удаляют отсасыванием, а оставшиеся 15 мл переливают в чашку Петри или бассейн для подсчета личинок для исследования. Мерный цилиндр следует промыть 10 мл водопроводной воды и эти промывные воды добавить к образцу в чашке Петри или чашке для подсчета личинок для исследования.

(ii) Пулы из менее 100 образцов

К общему пулу из 100 образцов можно добавить до 15 отдельных образцов и исследовать их вместе с этими образцами. Если исследуется более 15 и менее 100 образцов, количество пищеварительной жидкости следует пропорционально уменьшить. 2. В случае положительного или сомнительного результата исследования коллективной пробы у каждой свиньи следует взять дополнительную пробу массой 20 г в соответствии с пунктом (b) выше. Образцы массой 20 г от пяти свиней следует объединить и исследовать методом, описанным выше. Таким образом будут исследованы образцы от 20 групп по пять свиней. При обнаружении трихинелл в объединенной пробе от пяти свиней необходимо взять еще 20 г проб от отдельных свиней в группе и каждую отдельно исследовать с использованием метода, описанного выше».

3. Добавлены следующие пункты IV, V и VI:

'IV. МЕТОД МЕХАНИЧЕСКОГО РАЗРАЖЕНИЯ ОБЪЕДИНЕННЫХ ПРОБ/МЕТОД СЕДИМЕНТАЦИИ

(а) Аппаратура и реагенты

- нож или ножницы для вырезания образцов,

- лотки, размеченные 50 квадратами, каждый из которых вмещает примерно 2 г мяса,

- модель Stomacher Lab-блендер 3 500 Thermo,

- полиэтиленовые пакеты, подходящие для блендера Stomacher Lab,

- конические сепарационные воронки емкостью 2 литра, желательно с тефлоновыми предохранительными пробками,

- стойки, кольца и зажимы,

- сита, размер ячейки 177 микрон, внешний диаметр 11 см с сеткой из нержавеющей стали,

- воронки внутренним диаметром не менее 12 см для крепления сит,

- стеклянные мерные цилиндры емкостью 100 мл,

- дозатор объемом 25 мл,

- стаканы емкостью 3 литра,

- ложка или стеклянная палочка для перемешивания пищеварительной жидкости в стакане,

- пластиковый шприц и трубка для отсасывания,

- мерная ложка на 6 г,

- термометр с точностью до ± 0,5°С в диапазоне от 1 до 100°С,

- вибратор, например. электробритва со снятой головкой,

- реле, которое будет включаться и выключаться с интервалом в одну минуту,

- трихиноскоп с горизонтальным столиком или стереомикроскоп с подходящим источником света,

- счетный бассейн для личинок (при использовании трихиноскопа): счетный бассейн для личинок изготавливается из акриловых пластин толщиной 3 мм следующим образом:

(i) дно бассейна должно быть размером 180 × 40 мм, размеченным на квадраты,

(ii) стороны должны быть 230 × 20 мм,

(iii) размер конца должен быть 40 × 20 мм. Дно и концы следует вставить между боковинами, образовав таким образом две небольшие ручки в обоих концах. Верхняя сторона днища должна быть приподнята на 7–9 мм от основания рамы, образованной бортами и торцами. Детали следует фиксировать с помощью клея, соответствующего материалу.

- несколько чашек Петри диаметром 9 см (при использовании стереомикроскопа), на нижней стороне которых с помощью заостренного инструмента размечены квадратные области исследования размером 10 × 10 мм,

- 17,5 % раствор соляной кислоты,

- концентрация пепсина 1: 10 000 NF (Национальный формуляр США)

соответствует 1:12 500 BP (Британская Фармакопея)

соответствует 2000 FIP (Международная фармацевтическая федерация),

- несколько 10-литровых баков, которые будут использоваться при обеззараживании аппарата, например обработке формалем, и для оставшегося пищеварительного сока в случае положительных результатов,

- весы с точностью до 0,1 г. (б) Сбор образцов

1. В случае целых туш отбирают пробу массой примерно 2 г от столба диафрагмы в месте перехода к жилистой части. При отсутствии столбов диафрагмы образец того же размера берут из реберной или грудинной части диафрагмы, из челюстной мышцы или мышцы живота.

2. Для кусков мяса необходимо отобрать образец скелетных мышц массой примерно 2 г, содержащий мало жира и, по возможности, расположенный вблизи костей или сухожилий.

(в) Метод

1. Процедура пищеварения

(i) Полные пулы (100 образцов за раз)

- Блендер Stomacher Lab-blender 3 500 должен быть оснащен двойным полиэтиленовым пакетом и регулятором температуры от 40 до 41 °C.

- Полтора литра воды, предварительно нагретой примерно до 32–35 °C, наливают во внутренний пластиковый пакет и нагревают воду до 40–41 °C.

- Затем к воде в желудке добавляют 25 мл 17,5%-ной соляной кислоты.

- Затем добавляют 100 образцов массой примерно 1 г каждый (при температуре от 25 до 30°С), отобранных из каждой отдельной пробы в соответствии с (b).

- Наконец добавляют 6 г пепсина. Такого порядка добавления следует строго придерживаться во избежание разложения пепсина.

- Затем аппарату желудка разрешается растирать содержимое мешка в течение 25 минут.

- Затем пластиковый пакет вынимают из желудка, а пищеварительную жидкость фильтруют через сито в 3-литровый стакан.

- Пластиковый пакет промывают примерно 100 мл воды, которую затем используют для ополаскивания сита и, наконец, добавляют к фильтрату в стакане.

К общему пулу из 100 образцов можно добавить до 15 отдельных образцов и исследовать их вместе с этими образцами.

(ii) Небольшие пулы, менее 100 образцов

- Блендер Stomacher Lab-blender 3 500 должен быть оснащен двойным полиэтиленовым пакетом и установлен регулятор температуры на уровне 40–41 °C.

- Пищеварительную жидкость готовят путем смешивания примерно полутора литров воды и 25 мл 17,5 % соляной кислоты. Добавляют 6 г пепсина и все перемешивают при температуре от 40 до 41°С. Такого порядка добавления следует строго придерживаться во избежание разложения пепсина.

- Из пищеварительной жидкости измеряется объем, соответствующий 15 мл на грамм образца (например, для 30 образцов требуемый объем составляет 30 × 15 мл или 450 мл) и переносится во внутреннюю часть двух пластиковых пакетов вместе с образцами мяса. примерно 1 г (при температуре от 25 до 30°С), взятых из каждого отдельного образца в соответствии с (b).

- В внешний мешок наливают воду температурой примерно 41°С до общего объема в двух мешках по полтора литра.

- Затем аппарату желудка разрешается растирать содержимое мешка в течение 25 минут.

- Затем пластиковый пакет снимают с желудка, а пищеварительную жидкость фильтруют через сито в 3-литровый стакан.

- Пластиковый пакет промывают примерно 100 мл воды, которую затем используют для ополаскивания сита и, наконец, добавляют к фильтрату в стакане.

2. Восстановление личинок путем седиментации

- К пищеварительной жидкости добавляют лед (300–400 г чешуйчатого льда, чешуйчатого льда или колотого льда), доводя его объем примерно до 2 литров. Затем пищеварительную жидкость перемешивают до тех пор, пока лед не растает.

В случае небольших бассейнов (см. 1 (ii)), количество льда должно быть соответственно уменьшено.

- Охлажденную пищеварительную жидкость переносят в 2-литровую делительную воронку, снабженную вибратором в дополнительном зажиме. - Седиментация в течение 30 минут, в течение которых седиментационная воронка периодически вибрирует, т. е. одна минута вибрации с последующей минутной паузой.

- Через 30 минут пробу осадка объемом 60 мл быстро переливают в мерный цилиндр емкостью 100 мл. (После использования воронку промывают раствором моющего средства).

- Пробе объемом 60 мл дают постоять не менее 10 минут, после чего надосадочную жидкость следует отсасывать, оставив объем 15 мл для исследования на наличие личинок.

- Для отсасывания можно использовать одноразовый шприц, оснащенный пластиковой трубкой.

Длина трубки должна быть такой, чтобы в мерном цилиндре оставалось 15 мл, когда фланцы шприца будут опираться на ободок цилиндра.

- Оставшиеся 15 мл переливают в счетную чашку для личинок или в две чашки Петри и исследуют с помощью трихиноскопа или стереомикроскопа соответственно.

- Дайджесты должны быть проверены, как только они будут готовы. Ни при каких обстоятельствах нельзя откладывать обследование на следующий день.

Если дайджесты неясны или не исследуются в течение 30 минут после их приготовления, их следует уточнить следующим образом. Итоговую пробу объемом 60 мл переливают в мерный цилиндр и оставляют на 10 минут. По истечении этого времени 45 мл надосадочной жидкости удаляют отсасыванием, а оставшиеся 15 мл доводят до 45 мл водопроводной водой. После дополнительного периода отстаивания в течение 10 минут 30 мл надосадочной жидкости удаляют отсасыванием, а оставшиеся 15 мл переливают в чашку Петри или бассейн для подсчета личинок для исследования. Мерный цилиндр следует промыть 10 мл водопроводной воды и эти промывные воды добавить к образцу в чашке Петри или чаше для подсчета личинок для исследования.

3. В случае положительного или сомнительного результата после исследования коллективной пробы от каждой свиньи следует взять дополнительную пробу массой 20 г в соответствии с пунктом (b) выше. Образцы массой 20 г от пяти свиней следует объединить и исследовать методом, описанным выше. Таким образом будут исследованы образцы от 20 групп по пять свиней. При обнаружении трихинелл в объединенной пробе от пяти свиней необходимо взять дополнительные пробы массой 20 г у отдельных свиней в группе и каждую отдельно исследовать с использованием метода, описанного выше.

V. МЕТОД МЕХАНИЧЕСКОГО РАЗРАЖЕНИЯ ОБЪЕДИНЕННЫХ ПРОБ/МЕТОД «НА ФИЛЬТРОВОЙ ИЗОЛЯЦИИ»

(а) Аппаратура и реагенты

Те, что указаны в методе IV (а).

Дополнительное оборудование к вышеперечисленному:

- воронка Гельмана объемом 1 л в комплекте с фильтродержателем (диаметр 45 мм),

- фильтрующие диски; Фильтрующие диски состоят из:

круглая сетка из нержавеющей стали с ячейкой 35 микрон (диаметр диска должен составлять 45 мм),

два резиновых кольца из резины толщиной 1 мм (внешний диаметр должен составлять 45 мм, внутренний – 38 мм),

круглая сетка помещается между двумя резиновыми кольцами и прикрепляется к ним с помощью двухкомпонентного клея, подходящего для двух материалов,

- колба Эрленмейера вместимостью 3 литра, снабженная боковой трубкой для отсасывания,

- фильтр-насос,

- полиэтиленовые пакеты вместимостью не менее 80 мл,

- оборудование для запечатывания полиэтиленовых пакетов,

- реннилаза, сила 1: 150 000 сокслет-единиц на грамм.

(б) Сбор образцов

См. метод IV (b). (в) Метод

1. Процедура пищеварения

(i) Полные пулы (100 образцов за раз)

См. метод IV (c) (1) (i).

(ii) Небольшие пулы, менее 100 образцов

См. метод IV (c) (1) (ii).

2. Восстановление личинок фильтрованием.

- К пищеварительной жидкости добавляют лед (300–400 г чешуйчатого льда, чешуйчатого льда или колотого льда), доводя его объем примерно до 2 литров.

В случае небольших бассейнов количество льда следует соответственно уменьшить.

- Затем пищеварительную жидкость перемешивают до тех пор, пока лед не растает. Затем охлажденную пищеварительную жидкость оставляют минимум на три минуты, чтобы личинки могли свернуться.

- Воронка Гельмана, оснащенная держателем фильтра и фильтрующим диском, устанавливается на колбу Эрленимейера, соединенную с фильтрующим насосом.

- Пищеварительную жидкость сливают в воронку Гельмана и фильтруют. Ближе к концу фильтрации прохождению пищеварительной жидкости через фильтр можно способствовать всасыванием фильтрующим насосом. Отсасывание должно прекратиться до того, как фильтр высохнет, т. е. когда в воронке останется от 2 до 5 мл жидкости.

- Когда вся пищеварительная жидкость будет отфильтрована, фильтрующий диск вынимают и помещают в пластиковый пакет емкостью 80 мл вместе с 15–20 мл раствора реннилазы. Раствор реннилазы готовят добавлением 2 г реннилазы к 100 мл водопроводной воды.

- Пластиковый пакет дважды запечатывают и помещают в желудок между внутренним и внешним пакетом.

- Желудок можно стучать в течение трех минут, например. пока он работает с полным или неполным пулом.

- Через три минуты пластиковый пакет с фильтрующим диском и раствором реннилазы вынимают из желудка и открывают ножницами. Жидкое содержимое переливают в счетную чашку для личинок или чашку Петри. Мешок промывают 5—10 мл воды, которую затем добавляют в ванночку для подсчета личинок для исследования трихиноскопом или в чашку Петри для исследования стереомикроскопом.

- Дайджесты должны быть проверены, как только они будут готовы. Ни при каких обстоятельствах нельзя откладывать обследование на следующий день.

Примечание

Фильтрующие диски никогда не следует использовать, если они не полностью очищены. Никогда не позволяйте грязным дискам высыхать.

Фильтровальные диски можно очистить, оставив их на ночь в растворе реннилазы. Перед применением их следует промыть свежим раствором реннилазы с помощью Stomacher.

3. В случае положительного или сомнительного результата после исследования коллективной пробы от каждой свиньи следует взять дополнительную пробу массой 20 г в соответствии с пунктом (b) выше. Образцы массой 20 г от пяти свиней следует объединить и исследовать методом, описанным выше. Таким образом будут исследованы образцы от 20 групп по пять свиней. При обнаружении трихинелл в объединенной пробе от пяти свиней необходимо взять дополнительные пробы массой 20 г у отдельных свиней в группе и каждую отдельно исследовать с использованием метода, описанного выше.

VI. МЕТОД МАГНИТНОЙ МЕШАЛКИ ДЛЯ РАСТВОРЕНИЯ ОБЪЕДИНЕННЫХ ПРОБ.

(а) Аппаратура и реагенты

- нож и пинцет для вырезания образцов,

- лотки, разделенные на 50 квадратов, каждый из которых вмещает образцы мяса весом примерно 2 г,

- мельница-блендер,

- магнитные мешалки с термостатируемой нагревательной пластиной и перемешивающими стержнями с тефлоновым покрытием длиной примерно 5 см, - конические делительные воронки емкостью 2 литра,

- стойки, кольца и зажимы,

- сита, размер ячейки 177 микрон, внешний диаметр 11 см с сеткой из нержавеющей стали,

- воронки внутренним диаметром не менее 12 см для крепления сит,

- стакан емкостью 3 литра,

- мерные цилиндры вместимостью около 50 мл или центрифужные пробирки,

- трихиноскоп с горизонтальным столиком или стереомикроскоп с подходящим источником света,

- счетный бассейн для личинок (при использовании трихиноскопа): счетный бассейн для личинок изготавливается из акриловых пластин толщиной 3 мм следующим образом:

(i) дно бассейна должно быть размером 180 × 40 мм, размеченным на квадраты,

(ii) стороны должны быть 230 × 20 мм,

(iii) размер конца должен быть 40 × 20 мм. Дно и концы следует вставить между боковинами, образовав таким образом две небольшие ручки в обоих концах. Верхняя сторона днища должна быть приподнята на 7–9 мм от основания рамы, образованной бортами и торцами. Детали следует фиксировать с помощью клея, соответствующего материалу.

- несколько чашек Петри диаметром 9 см (при использовании стереомикроскопа), на нижней стороне которых с помощью заостренного инструмента размечены квадратные области исследования размером 10 × 10 мм,

- алюминиевая фольга,

- 25 % соляная кислота,

- концентрация пепсина: 1: 10 000 NF (Национальный формуляр США)

соответствует 1:12 500 BP (Британская Фармакопея)

соответствует 2000 FIP (Международная фармацевтическая федерация),

- водопроводная вода, нагретая до 46-48°С,

- несколько 10-литровых баков, которые будут использоваться при обеззараживании аппарата, например обработке формалем, и для оставшегося пищеварительного сока в случае положительных результатов,

- весы с точностью до 0,1 г.

(б) Сбор образцов

1. В случае целых туш отбирают пробу массой примерно 2 г от столба диафрагмы в месте перехода к жилистой части. При отсутствии столбов диафрагмы образец того же размера берут из реберной или грудинной части диафрагмы, из челюстной мышцы или мышц живота.

2. Для кусков мяса необходимо отобрать образец скелетных мышц массой примерно 2 г, содержащий мало жира и, по возможности, расположенный вблизи костей или сухожилий.

(в) Метод

1. (i) Полные пулы (100 образцов за раз)

- 100 проб примерно по 1 г каждая, взятых из каждой отдельной пробы в соответствии с (b), измельчают в блендере Moulinette. Блендер следует включить три-четыре раза примерно на одну секунду каждый раз.

- Нарезанное мясо перекладываем в 3-литровый стакан и присыпаем 10 г пепсина. В стакан наливают 2 л водопроводной воды, предварительно нагретой до 46–48°С, вместе с 16 мл соляной кислоты.

- Насадка для измельчения блендера «Мулинетт» несколько раз погружается в пищеварительную жидкость стакана, чтобы удалить прилипшее мясо.

- Мешалку помещают в стакан и стакан накрывают алюминиевой фольгой. - Стакан помещают на предварительно нагретую нагревательную пластину магнитной мешалки и начинают процесс перемешивания. Перед началом процесса перемешивания магнитную мешалку следует отрегулировать так, чтобы она поддерживала постоянную температуру от 44 до 46 °С на протяжении всего периода работы. В процессе перемешивания пищевая жидкость должна вращаться с достаточно высокой скоростью, чтобы создавать глубокие вихри без разбрызгивания.

- Дигестивную жидкость перемешивают в течение 30 минут, по окончании чего мешалка выключается и пищеварительная жидкость выливается через сито в отстойную воронку.

- Пищеварительной жидкости дают постоять в воронке в течение 30 минут.

- Через 30 минут образец пищеварительной жидкости объемом 40 мл быстро сливается в мерный цилиндр или центрифужную пробирку.

- Образцу объемом 40 мл оставляют на 10 минут, по истечении которого отсасывают 30 мл надосадочной жидкости, оставляя объем 10 мл.

- Оставшуюся пробу осадка объемом 10 мл выливают в чашку для подсчета личинок или чашку Петри.

- Затем цилиндр или центрифужную пробирку промывают примерно 10 мл водопроводной воды, которую необходимо добавить к образцу в чашке для подсчета личинок или чашке Петри. Затем образец исследуют с помощью трихиноскопа или стереомикроскопа соответственно.

- Дайджесты должны быть проверены, как только они будут готовы. Ни при каких обстоятельствах нельзя откладывать обследование на следующий день.

Если дайджесты не исследуются в течение 30 минут после их приготовления, их следует уточнить следующим образом. Конечный образец объемом около 40 мл сливают в мерный цилиндр и оставляют стоять на 10 минут, после чего удаляют 30 мл надосадочной жидкости, оставляя объем 10 мл. Этот объем доводят до 40 мл водопроводной водой. После дополнительного периода отстаивания в течение 10 минут 30 мл надосадочной жидкости отсасывают, оставляя объем 10 мл для исследования в чашке Петри или бассейне для подсчета личинок. Мерный цилиндр следует промыть 10 мл водопроводной воды и эти промывные воды добавить к образцу в чашке Петри или чаше для подсчета личинок для исследования.

Если при исследовании осадок окажется непрозрачным, пробу следует перелить в мерный цилиндр и довести объем до 40 мл водопроводной водой, а затем выполнить описанную выше процедуру.

(ii) Пулы из менее 100 образцов

При необходимости к общему пулу из 100 образцов можно добавить до 15 образцов по 1 г каждый и исследовать вместе с этими образцами в соответствии с (c) (1) (i). Более 15 образцов следует исследовать как единый пул. Для пулов объемом до 50 образцов объем пищеварительной жидкости можно уменьшить до 1 литра.

2. В случае положительного или сомнительного результата исследования коллективной пробы у каждой свиньи следует взять дополнительную пробу массой 20 г в соответствии с пунктом (b) выше. Образцы массой 20 г от пяти свиней следует объединить и исследовать методом, описанным выше. Таким образом будут исследованы образцы от 20 групп по пять свиней. При обнаружении трихинелл в объединенной пробе от пяти свиней необходимо взять еще 20 г проб от отдельных свиней в группе и каждую отдельно исследовать с использованием метода, описанного выше».

B. Приложение II, глава I, параграф 1 настоящим вносится следующим образом:

1. Текст пункта (б) заменяется следующим:

«(b) соответствующим образом оборудованная запираемая комната для осмотра, которая может быть затемнена при проведении осмотра с помощью трихиноскопа;»

2. Пункт (е) исключен; точки (g), (h), (i), (j), (k), (l), (m) и (n) становятся соответственно (f), (g), (h), (i) , (j), (k), (l) и (m). 3. Текст нового пункта (ж) заменен следующим:

'(g) санузел для очистки и дезинфекции исследовательского оборудования (например, контейнеров для проб, компрессоров, ножей и ножниц), включающий:

- водонепроницаемое напольное покрытие, устойчивое к гниению, легко чистящееся и дезинфицируемое,

- гладкие стены, которые на высоте не менее 2 м покрыты моющимся светлым покрытием или краской.

Это положение не требуется применять при использовании методов, указанных в пунктах II, III, IV, V, VI Приложения I, при условии, что лаборатории оборудованы большой раковиной с подходящим водопроводом».