Директива Комиссии 84/4/EEC от 20 декабря 1983 г., вносящая поправки в Директивы 71/393/EEC, 72/199/EEC и 78/633/EEC, устанавливающая методы анализа Сообщества для официального контроля кормов.

*****

ДИРЕКТИВА КОМИССИИ

от 20 декабря 1983 г.

внесение изменений в Директивы 71/393/EEC, 72/199/EEC и 78/633/EEC, устанавливающие методы анализа Сообщества для официального контроля кормов

(84/4/ЕЕС)

КОМИССИЯ ЕВРОПЕЙСКОЙ

СООБЩЕСТВА,

Принимая во внимание Договор о создании Европейского экономического сообщества,

Принимая во внимание Директиву Совета 70/373/EEC от 20 июля 1970 г. о введении методов Сообщества отбора проб и анализа для официального контроля кормов (1), с последними поправками, внесенными Актом о присоединении Греции, и, в частности, Статьей 2 этого,

Принимая во внимание, что Директивы Комиссии 71/393/EEC (2), 72/199/EEC (3) и 78/633/EEC (4) устанавливают методы анализа сырых масел и жиров, вирджиниамицина и бацитрацина цинка; поскольку существует необходимость замены этих методов методами, отражающими достижения научно-технических знаний;

Поскольку меры, предусмотренные настоящей Директивой, соответствуют мнению Постоянного комитета по кормам,

ПРИНЯЛ НАСТОЯЩУЮ ДИРЕКТИВУ:

Статья 1

В Приложении к Директиве 71/393/ЕЕС часть IV «Определение сырых масел и жиров» заменена Приложением I к настоящей Директиве.

Статья 2

В Приложении II к Директиве 72/199/ЕЕС часть 5 «Определение вирджиниамицина путем диффузии в агаризованной среде» заменена Приложением II к настоящей Директиве.

Статья 3

В Приложении к Директиве 78/633/ЕЕС часть 1 «Определение цинкбацитрацина путем диффузии в агаризованной среде» заменена Приложением III к настоящей Директиве.

Статья 4

Государства-члены должны не позднее 1 июня 1984 г. ввести в действие законы, правила или административные положения, необходимые для соблюдения настоящей Директивы, и немедленно проинформировать об этом Комиссию.

Статья 5

Данная Директива адресована государствам-членам.

Совершено в Брюсселе 20 декабря 1983 года.

Для Комиссии

Пол ДАЛСАГЕР

Член Комиссии

(1) ОЖ № L 170, 3.8.1970, с. 2.

(2) ОЖ № L 279, 20.12.1971, с. 7.

(3) ОЖ № L 123, 29.5.1972, с. 6.

(4) ОЖ № L 206, 29.7.1978, с. 43.

ПРИЛОЖЕНИЕ I

'4. ОПРЕДЕЛЕНИЕ СЫРЫХ МАСЕЛ И ЖИРОВ

1. Цель и сфера применения

Этот метод позволяет определять содержание сырых масел и жиров в кормах. Он не охватывает анализ семян масличных культур и плодов масличных культур, определенный в Регламенте Совета 136/66/EEC от 22 сентября 1966 г.

В зависимости от характера корма необходимо использовать любой из двух описанных методов.

1.1. Метод А

Применимо к сырым кормам растительного происхождения, за исключением тех, которые, как известно, содержат масла и жиры, которые невозможно полностью экстрагировать легкой нефтью без предварительного гидролиза. Среди них глютен, дрожжи, соевые и картофельные белки. Этот метод применим также к комбикормам, за исключением тех, которые содержат сухое молоко или из которых масла и жиры не могут быть полностью экстрагированы легкой нефтью без предварительного гидролиза.

1.2. Метод Б

Применимо к прямым кормам животного происхождения, а также к кормам, указанным в пункте 1.1 как исключение для метода А.

2. Принцип

2.1. Метод А

Пробу экстрагируют легкой петролейной кислотой. Растворитель отгоняют, остаток сушат и взвешивают.

2.2. Метод Б

Образец обрабатывают при нагревании соляной кислотой. Смесь охлаждают и фильтруют. Остаток промывают, сушат и подвергают определению по методу А.

3. Реагенты

3.1. Легкий петролейный газ, температура кипения: от 40 до 60 °C. Бромное число должно быть менее 1, а остаток от испарения - менее 2 мг/100 мл.

3.2. Сульфат натрия, безводный.

3.3. Соляная кислота 3н.

3.4. Фильтрующее средство, напр. Кизельгур, Гифло-суперцел.

4. Аппарат

4.1. Экстракционный аппарат. Если имеется сифон (аппарат Сокслета), скорость рефлюкса должна быть такой, чтобы производить около 10 циклов в час; если речь идет о несифонном типе, скорость рефлюкса должна составлять около 10 мл в минуту.

4.2. Насадки экстракционные, не содержащие веществ, растворимых в легкой нефти, и имеющие пористость, соответствующую требованиям пункта 4.1.

4.3. Сушильная печь: вакуумная печь с температурой 75 ± 3 °C или воздушная печь с температурой 100 ± 3 °C.

5. Процедура

5.1. Метод А (см. пункт 8.1)

Взвешивают 5 г пробы с точностью до 1 мг, переносят ее в экстракционный наперсток (4.2) и накрывают обезжиренным тампоном ваты.

Поместите наперсток в экстрактор (4.1) и экстрагируйте в течение шести часов петролейным эфиром (3.1). Соберите легкий нефтяной экстракт в сухую взвешенную колбу, содержащую фрагменты пемзы (1).

Отогнать растворитель. Остаток от испарения сушат, выдерживая опоку в течение полутора часов в сушильном шкафу (4.3). Оставить остывать в эксикаторе и взвесить. Снова просушите в течение 30 минут, чтобы гарантировать постоянство веса масел и жиров (потеря веса между двумя последовательными взвешиваниями должна составлять менее 1 мг).

5.2. Метод Б

Взвешивают 2,5 г пробы с точностью до 1 мг (см. пункт 8.2), помещают в стакан вместимостью 400 мл или коническую колбу вместимостью 300 мл и добавляют 100 мл кислоты хлористоводородной 3N (3.3) и фрагменты пемзы. Накройте стакан часовым стеклом или снабдите коническую колбу обратным холодильником. Доведите смесь до слабого кипения на медленном огне или на плите и держите там один час. Не допускайте прилипания продукта к стенкам контейнера.

Охладите и добавьте необходимое количество средства для фильтрации (3.4), чтобы предотвратить потерю масла и жира во время фильтрации. Профильтровать через увлажненный обезжиренный двойной бумажный фильтр. Остаток промывают холодной водой до получения нейтрального фильтрата. Убедитесь, что фильтрат не содержит масла или жиров. Их наличие указывает на то, что перед гидролизом образец необходимо экстрагировать легкой петролейной кислотой по методу А.

Поместите двойную фильтровальную бумагу, содержащую остаток, на часовое стекло и высушите в течение полутора часов в духовке при температуре 100 ± 3 °С.

Поместите двойную фильтровальную бумагу, содержащую сухой остаток, в насадку для экстракции (4.2) и накройте обезжиренным тампоном ваты. Поместите наперсток в экстрактор (4.1) и действуйте, как указано во втором и третьем абзацах пункта 5.1.

6. Выражение результата

Выразите массу остатка в процентах от пробы.

7. Повторяемость

Разница между результатами двух параллельных определений, выполненных на одной и той же пробе одним и тем же аналитиком, не должна превышать:

- 0,2 % по абсолютной величине при содержании сырых масел и жиров менее 5 %,

- 4,0 % относятся к наивысшему результату при содержании от 5 до 10 %,

- 0,4 % по абсолютной величине, для содержания более 10 %.

8. Наблюдения

8.1. Для продуктов с повышенным содержанием масел и жиров, трудно измельчаемых или непригодных для получения однородной уменьшенной пробы, поступают следующим образом.

Взвешивают 20 г образца с точностью до 1 мг и смешивают с 10 г или более безводного сульфата натрия (3.2). Экстрагировать петролейным эфиром (3.1), как указано в пункте 5.1. Полученный экстракт доводят до 500 мл петролейным эфиром (3.1) и гомогенизируют. Возьмите 50 мл раствора и поместите в небольшую сухую взвешенную колбу, содержащую фрагменты пемзы (1). Растворитель отогнать, высушить и действовать, как указано в последнем абзаце пункта 5.1.

Из остатков экстракции, оставшихся в насадке, удалить растворитель, измельчить остаток до крупности 1 мм, вернуть его в насадку для экстракции (сульфат натрия не добавлять) и действовать, как указано в втором и третьем абзацах пункта 5.1.

Рассчитайте содержание масел и жиров в процентах от пробы по следующей формуле:

(10 а + б) × 5

где:

а = масса остатка после первой экстракции в граммах (аликвотная часть экстракта),

b = масса остатка после второй экстракции в граммах.

8.2. Для продуктов с низким содержанием масел и жиров испытуемая проба может быть увеличена до 5 г».

(1) Если масло или жир должны пройти последующие испытания качества, замените фрагменты пемзы стеклянными шариками.

(1) Если масло или жир должны пройти последующие испытания качества, замените фрагменты пемзы стеклянными шариками.

ПРИЛОЖЕНИЕ II

'5. Определение вирджиниамицина

- путем диффузии в агаризованной среде -

1. Цель и сфера применения

Метод предназначен для определения вирджиниамицина в кормах и премиксах. Нижний предел определения составляет 2 мг/кг (2 ppm) (1).

2. Принцип

Пробу экстрагируют метанольным раствором Твина 80. Экстракт декантируют или центрифугируют и разбавляют. Его антибиотическую активность определяют путем измерения диффузии вирджиниамицина в агаризованной среде, инокулированной Micrococcus luteus. Диффузия проявляется образованием зон ингибирования микроорганизма. Диаметр этих зон принимают прямо пропорциональным логарифму концентрации антибиотика в диапазоне используемых концентраций антибиотика.

3. Микроорганизм: Micrococcus luteus ATCC 9341 (NCTC 8340, NCIB 8553).

3.1. Поддержание животноводческой культуры

Засейте пробирки, содержащие откосы культуральной среды (4.1), Micrococcus luteus и инкубируйте в течение 24 часов при 30 °C. Храните культуру в холодильнике при температуре около 4 ° C. Делайте повторную прививку каждые две недели.

3.2. Приготовление бактериальной суспензии (а)

Соберите ростки со свежеприготовленного агара (3.1) с 2–3 мл раствора хлорида натрия (4.3). Эту суспензию инокулируют в 250 мл культуральной среды (4.1), содержащейся в колбе Ру, и инкубируют в течение 18–20 часов при 30 °С. Собирают наросты в 25 мл раствора хлорида натрия (4.3) и перемешивают. Разбавляют суспензию в соотношении 1/10 раствором натрия хлорида (4.3). Светопропускание суспензии должно составлять около 75 %, измеренное при длине волны 650 нм в ячейке размером 1 см относительно раствора хлорида натрия (4.3). Эту суспензию можно хранить в течение одной недели при температуре около 4 °C.

4. Питательные среды и реагенты.

4.1. Культуральная и аналитическая среда (b)

1,2 // Пептон мясной // 6,0 г // Триптон // 4,0 г // Экстракт дрожжевой // 3,0 г // Экстракт мясной // 1,5 г // Глюкоза // 1,0 г / / Агар // 10,0–20,0 г // Вода // 1 000 мл // pH 6,5 (после стерилизации). //

4.2. Фосфатный буфер, pH 6

1.2 // Калия гидрофосфат, K2HPO4 // 2,0 г // Калия дигидрофосфат, KH2PO4 // 8,0 г // Вода до // 1 000 мл

4.3. Раствор хлорида натрия 0,8 % (мас./об.): растворить 8 г хлорида натрия в воде и довести до 1 000 мл; стерилизовать.

4.4. Метанол.

4.5. Смесь фосфатного буфера (4.2)/метанола (4.4): 80/20 (по объему).

4.6. Метанольный раствор Твин 80 0,5 % (мас./об.): растворите 5 г Твина 80 в метаноле (4.4) и разбавьте метанолом до 1000 мл.

4.7. Стандартное вещество: вирджиниамицин известной активности.

5. Стандартные решения

Точную навеску стандартного вещества (4.7) растворяют в метаноле (4.4) и разбавляют метанолом (4.4), получая исходный раствор, содержащий 1000 мг вирджиниамицина на мл.

При хранении в колбе с пробкой при температуре 4°C этот раствор стабилен до пяти дней.

Из этого маточного раствора путем последовательного разбавления смесью (4.5) приготовьте следующие растворы:

s8 1 мг/мл

с4 0,5 мг/мл

с2 0,25 мг/мл

с1 0,125 мг/мл

6. Приготовление экстракта и аналитических растворов

6.1. Добыча

6.1.1. Продукты с содержанием вирджиниамицина до 100 мг/кг.

Отвешивают пробу массой 50 г, добавляют 200 мл раствора (4.6) и встряхивают в течение 30 минут. Оставляют отстояться или центрифугируют, отбирают 20 мл надосадочного раствора и упаривают до объема около 5 мл на роторном испарителе при температуре не выше 40 °С. Разбавьте остаток смесью (4.5) до получения ожидаемого содержания вирджиниамицина 1 мг/мл (= u8).

6.1.2. Продукты с содержанием вирджиниамицина более 100 мг/кг.

Отвешивают пробу массой не более 10,0 г и содержащую от 1 до 50 мг вирджиниамицина, добавляют 100 мл раствора (4.6) и встряхивают в течение 30 мин. Оставьте отстояться или центрифугируйте, затем разбавьте надосадочный раствор смесью (4.5) до получения ожидаемого содержания вирджиниамицина 1 мкг/мл (= u8).

6.2. Аналитические решения

Из раствора и8 готовят растворы и4 (расчетное содержание: 0,5 мг/мл), и2 (расчетное содержание: 0,25 мг/мл) и и1 (расчетное содержание: 0,125 мг/мл) путем последовательного разведения (1 + 1). ) смесью (4.5).

7. Процедура анализа

7.1. Инокуляция аналитической среды

Инокулируют среду для анализа (4.1) бактериальной суспензией (3.2) при температуре около 50 °C. Предварительными испытаниями на чашках со средой (4.1) определяют количество бактериальной суспензии, необходимое для получения наиболее крупных и четких зон ингибирования при различных концентрациях вирджиниамицина.

7.2. Подготовка тарелок

Диффузию через агар проводят в чашках с четырьмя концентрациями стандартного раствора (s8, s4, s2 и s1) и четырьмя концентрациями анализируемого раствора (u8, u4, u2 и u1). Эти четыре концентрации экстракта и стандарта обязательно должны быть помещены в каждую чашку. Для этого подбирают чашки достаточно большого размера, чтобы в агаровой среде можно было сделать не менее восьми отверстий диаметром от 10 до 13 мм и расстоянием между центрами не менее 30 мм. Испытание может проводиться на пластинах, состоящих из листа стекла с помещенным сверху алюминиевым или пластиковым кольцом диаметром 200 мм и высотой 20 мм.

Налейте в чашки определенное количество среды (4.1), инокулированной, как указано в пункте 7.1, так, чтобы получился слой толщиной около 2 мм (60 мл для чашки диаметром 200 мм). Дайте установить его ровно, просверлите отверстия и поместите в них точно отмеренные объемы аналитического и стандартного растворов (от 0,10 до 0,15 мл на отверстие, в зависимости от диаметра). Каждую концентрацию применяют не менее четырех раз, чтобы каждое определение подвергалось оценке 32 зон ингибирования.

7.3. Инкубация

Инкубируйте чашки в течение 16–18 часов при температуре 30 ± 2 °C.

8. Оценка

Измерьте диаметр зон торможения с точностью до 0,1 мм. Запишите средние значения для каждой концентрации на полулогарифмической миллиметровой бумаге, показывая логарифм концентраций по отношению к диаметрам зон ингибирования. Постройте линии наилучшего соответствия как стандартного решения, так и экстракта, например, как показано ниже: Определите точку «наилучшего соответствия» для стандартного наименьшего уровня (SL), используя формулу:

1.2 // (а) СЛ = // 7с1 + 4с2 + с4 - 2с8 10

Определите точку «наилучшего соответствия» для стандартного наивысшего уровня (SH), используя формулу:

1,2 // (б) Ш = // 7с8 + 4с4 + с2 – 2с1 10

Аналогичным образом рассчитайте точки «наилучшего соответствия» для самого низкого уровня экстракта (UL) и самого высокого уровня экстракта (UH), заменив u1, u2, u4 и u8 на s1, s2, s4 и s8 в приведенных выше формулах.

Запишите рассчитанные значения SL и SH на одной миллиметровой бумаге и соедините их, чтобы получить линию «наилучшего соответствия» стандартному раствору. Аналогично запишите UL и UH и соедините их, чтобы получить строку, наиболее подходящую для фрагмента.

При отсутствии каких-либо помех линии должны быть параллельны. Для практических целей линии можно считать параллельными, если значения (SH-SL) и (UH-UL) не отличаются более чем на 10 % от своего среднего значения.

Если окажется, что линии непараллельны, либо u1 и s1, либо u8 и s8 можно отбросить и рассчитать SL, SH, UL и UH с использованием альтернативных формул, чтобы получить альтернативные линии «наилучшего соответствия»:

1.2.3.4 // (a') SL = // 5s1 + 2s2 - s4 6 // или // 5s2 + 2s4 - s8 6 // (b' ) SH = // 5s4 + 2s2 - s1 6 // или / /5с8 + 2с4 – с2 6

и аналогично для UL и UH. Должны соблюдаться те же критерии параллелизма. Тот факт, что результат был рассчитан по трем уровням, должен быть отмечен в итоговом отчете.

Если линии считаются параллельными, вычислите логарифм относительной активности (log A) с помощью одной из следующих формул, в зависимости от того, три или четыре уровня использовались для оценки параллельности.

На четыре уровня

1,2 // (в) Log A = // (u1 + u2 + u4 + u8 - s1 - s2 - s4 - s8) × 0,602 u4 + u8 + s4 + s8 - u1 - u2 - s1 - s2

На три уровня

1,2 // (d) Log A = // (u1 + u2 + u4 - s1 - s2 - s4) × 0,401 u4 + s4 - u1 - s1 // или // // (d' ) Log A = // ( и2 + и4 + и8 - с2 - с4 - с8)×0,401 и8 + с8 - и2 - с2

Активность экстракта образца = активность соответствующего стандарта × A

(и8 = s8 × А)

Если обнаруживается, что относительная активность выходит за пределы диапазона от 0,5 до 2,0, повторите анализ, внося соответствующие корректировки в концентрации экстракта или, если это невозможно, в стандартные растворы. Если относительную активность невозможно привести в требуемый диапазон, любой полученный результат следует считать приблизительным, и это следует отметить в итоговом отчете.

Если линии считаются непараллельными, повторите определение. Если параллелизм все же не достигнут, определение следует признать неудовлетворительным.

Результат выразите в миллиграммах вирджиниамицина на килограмм корма. 9. Повторяемость

Разница между результатами двух параллельных определений, выполненных на одной и той же пробе одним и тем же аналитиком, не должна превышать:

- 2 мг/кг по абсолютной величине при содержании вирджиниамицина до 10 мг/кг,

- 20 % относятся к самому высокому значению для содержания от 10 до 25 мг/кг,

- 5 мг/кг по абсолютной величине для содержания от 25 до 50 мг/кг,

- 10 % относятся к самому высокому значению для содержания выше 50 мг/кг».

(1) 1 мг вирджиниамицина эквивалентен 1 000 британским единицам.

(а) Могут использоваться другие методы при условии, что установлено, что они дают аналогичные бактериальные суспензии.

(б) Можно использовать любую коммерческую питательную среду аналогичного состава, дающую такие же результаты.

ПРИЛОЖЕНИЕ III

'1. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЦИНКА БАЦИТРАЦИНА

- путем диффузии в агаризованной среде -

1. Цель и сфера применения

Метод предназначен для определения цинк-бацитрацина в кормах и премиксах. Нижний предел определения составляет 5 мг/кг (5 ppm) (1).

2. Принцип

Пробу экстрагируют при pH 2 смесью метанол/вода/соляная кислота и раствором сульфида натрия. Добавление сульфида натрия необходимо для осаждения растворимых солей меди, которые могут помешать анализу. Экстракт доводят до pH 6,5, концентрируют (при необходимости) и разбавляют. Его антибиотическую активность определяют путем измерения диффузии бацитрацина цинка в агаризованной среде, инокулированной Micrococcus luteus (flavus). Диффузия проявляется образованием зон ингибирования микроорганизма. Диаметр этих зон принимают прямо пропорциональным логарифму концентрации антибиотика в диапазоне используемых концентраций антибиотика.

3. Микроорганизм: Micrococcus luteus (flavus) ATCC 10240.

3.1. Поддержание животноводческой культуры

Инокулируют пробирки, содержащие откосы культуральной среды (4.1), Micrococcus luteus (flavus) и инкубируют в течение 24 часов при 30 °C. Храните культуру в холодильнике при температуре около 4 ° C. Делайте повторную прививку каждые две недели.

3.2. Приготовление бактериальной суспензии (а)

Соберите ростки со свежеприготовленного агара (3.1) с 2–3 мл раствора хлорида натрия (4.3). Эту суспензию инокулируют в 250 мл культуральной среды (4.1), содержащейся в колбе Ру, и инкубируют в течение 18–20 часов при 30 °С. Собирают наросты в 25 мл раствора хлорида натрия (4.3) и перемешивают. Разбавляют суспензию в соотношении 1/10 раствором натрия хлорида (4.3). Светопропускание суспензии должно составлять около 75 %, измеренное при длине волны 650 нм в ячейке размером 1 см относительно раствора хлорида натрия (4.3). Эту суспензию можно хранить в течение одной недели при температуре около 4 °C.

4. Питательные среды и реагенты.

4.1. Культуральная среда (б)

1,2 // Пептон мясной // 6,0 г // Триптон // 4,0 г // Экстракт дрожжевой // 3,0 г // Экстракт мясной // 1,5 г // Глюкоза // 1,0 г / / Агар // 10,0–20,0 г // Вода // 1 000 мл // pH от 6,5 до 6,6 (после стерилизации). //

4.2. Аналитическая среда (б)

1,2 // Триптон // 10,0 г // Дрожжевой экстракт // 3,0 г // Мясной экстракт // 1,5 г // Глюкоза // 1,0 г // Агар // 10,0 до 20, 0 г // Твин 80 // 1 мл // Вода // 1 000 мл // pH 6,5 (после стерилизации). //

4.3. Раствор хлорида натрия 0,8 % (мас./об.): растворить 8 г хлорида натрия в воде и довести до 1 000 мл; стерилизовать.

4.4. Смесь метанола/воды соляной кислоты (4.6):

80/17,5/2,5 (ж/б/б).

4.5. Фосфатный буфер, pH 6,5:

1.2 // Гидрофосфат калия K2HPO4 // 22,15 г. // Калия дигидрофосфат KH2PO4 // 27,85 г. // Вода до // 1 000 мл.

4.6. Соляная кислота (d: от 1,18 до 1,19).

4.7. Соляная кислота (0,1 М).

4.8. Раствор гидроксида натрия 1 М.

4.9. Сульфид натрия примерно 0,5 М раствор.

4.10. Раствор бромкрезолового пурпурного 0,04 % (мас./об.): растворите 0,1 г бромкрезолового пурпурного в 18,5 мл 0,01 М раствора гидроксида натрия. Доведите объем до 250 мл водой и перемешайте.

4.11. Стандартное вещество: цинкбацитрацин известной активности (в в/д).

5. Стандартные решения

Отвешивают стандартный цинкбацитрацин (4.11), соответствующий 1050 ед. (в соответствии с указанным видом деятельности). Добавляют 5 мл 0,1 М соляной кислоты (4.7) и оставляют на 15 минут. Добавьте 30 мл воды, доведите pH до 4,5 фосфатным буфером (4,5) (около 4 мл), доведите водой объем до 50 мл и хорошо перемешайте (1 мл = 21 ед.).

Из этого раствора путем последовательных разбавлений фосфатным буфером (4.5) готовят следующие растворы:

s8 0,42 МЕ/мл

с4 0,21 ед./мл

с2 0,105 МЕ/мл

с1 0,0525 МЕ/мл

6. Приготовление экстракта и аналитических растворов

6.1. Добыча

6.1.1. Премиксы и минеральные корма

Отвешивают пробу массой от 2,0 до 5,0 г, добавляют 29,0 мл смеси (4.4) и 1,0 мл раствора сульфида натрия (4.9) и кратковременно встряхивают. Убедитесь, что pH составляет около 2. Встряхивайте 10 минут, добавьте 30 мл фосфатного буфера (4,5), встряхивайте 15 минут и центрифугируйте. Отбирают подходящую аликвоту надосадочного раствора и доводят pH до 6,5 с помощью 1 М раствора гидроксида (4.8) с помощью pH-метра или с помощью раствора бромкрезолового пурпурного (4.10) в качестве индикатора. Разбавьте фосфатным буфером (4.5) до получения ожидаемого содержания цинк-бацитрацина 0,42 МЕ/мл (=u8).

6.1.2. Протеиновые концентраты

Отвешивают пробу массой 10,0 г, добавляют 49,0 мл смеси (4.4) и 1,0 мл раствора сульфида натрия (4.9) и кратковременно встряхивают. Убедитесь, что pH составляет около 2. Встряхивайте в течение 10 минут. Добавьте 50 мл фосфатного буфера (4,5), встряхивайте 15 минут и центрифугируйте. Берут подходящий объем надосадочного раствора и доводят pH до 6,5 с помощью 1 М раствора гидроксида натрия (4.8) с помощью pH-метра или с помощью раствора бромкрезолового пурпурного (4.10) в качестве индикатора. Выпарить примерно до половины объема в роторном испарителе при температуре не выше 35 °С.

Разбавьте фосфатным буфером (4.5) до получения ожидаемого содержания бацитрацина цинка 0,42 МЕ/мл (= мк8).

6.1.3. Другие каналы

Взвесьте образец массой 10,0 г (20,0 г при ожидаемом содержании бацитрацина цинка 5 мг/кг). Добавляют смесь 24,0 мл смеси (4.4) и 1,0 мл раствора сульфида натрия (4.9) и гомогенизируют в течение 10 минут. Добавьте 25 мл фосфатного буфера (4,5), встряхивайте 15 минут и центрифугируйте. Берут 20 мл надосадочного раствора и доводят pH до 6,5 с помощью 1 М раствора гидроксида натрия (4.8) с помощью pH-метра или с помощью раствора бромкрезолового пурпурного (4.10) в качестве индикатора. Выпарить примерно до 4 мл в ротационном испарителе при температуре не выше 35°С. Разбавьте остаток фосфатным буфером (4.5) до получения ожидаемого содержания цинкбацитрацина 0,42 МЕ/мл (= мк8).

6.2. Аналитические решения

Из раствора и8 готовят растворы и4 (расчетное содержание: 0,21 ед./мл), и2 (расчетное содержание: 0,105 ед./мл) и и1 (расчетное содержание: 0,0525 ед./мл) путем последовательного разведения (1 + 1). ) с фосфатным буфером (4.5). 7. Процедура анализа

7.1. Инокуляция аналитической среды

Инокулируют среду для анализа (4.2) бактериальной суспензией (3.2) при температуре около 50 °C. Путем предварительных испытаний на чашках с аналитической средой (4.2) определяют количество бактериальной суспензии, необходимое для получения наиболее крупных и четких зон ингибирования при различных концентрациях цинк-бацитрацина.

7.2. Подготовка тарелок

Диффузию через агар проводят в чашках с четырьмя концентрациями стандартного раствора (s8, s4, s2 и s1) и четырьмя концентрациями анализируемого раствора (u8, u4, u2 и u1). Эти четыре концентрации экстракта и стандарта обязательно должны быть помещены в каждую чашку. Для этого подбирают чашки достаточно большого размера, чтобы в агаровой среде можно было сделать не менее восьми отверстий диаметром от 10 до 13 мм и расстоянием между центрами не менее 30 мм. Испытание может проводиться на пластинах, состоящих из листа стекла с помещенным сверху алюминиевым или пластиковым кольцом диаметром 200 мм и высотой 20 мм.

Налейте в чашки определенное количество среды (4.2), инокулированной, как указано в пункте 7.1, так, чтобы получился слой толщиной около 2 мм (60 мл для чашки диаметром 200 мм). Дайте установиться в горизонтальном положении, просверлите отверстия и поместите в них точно отмеренные объемы пробы и стандартных растворов (от 0,10 до 0,15 мл на отверстие в зависимости от диаметра). Каждую концентрацию применяют не менее четырех раз, чтобы каждое определение подвергалось оценке 32 зон ингибирования.

7.3. Инкубация

Инкубируйте чашки в течение 16–18 часов при температуре 30 ± 2 °C.

8. Оценка

Измерьте диаметр зон торможения с точностью до 0,1 мм. Запишите средние значения для каждой концентрации на полулогарифмической миллиметровой бумаге, показывая логарифм концентраций по отношению к диаметрам зон ингибирования. Постройте линии наилучшего соответствия стандартного решения и экстракта, например, как показано ниже:

Определите точку «наилучшего соответствия» для стандартного нижнего уровня (SL) по формуле:

1.2 // (а) СЛ = // 7с1 + 4с2 + с4 - 2с8 10

Определите точку «наилучшего соответствия» для стандартного наивысшего уровня (SH), используя формулу:

1,2 // (б) Ш = // 7с8 + 4с4 + с2 – 2с1 10

Аналогичным образом рассчитайте точки «наилучшего соответствия» для самого низкого уровня экстракта (UL) и самого высокого уровня экстракта (UH), заменив u1, u2, u4 и u8 на s1, s2, s4 и s8 в приведенных выше формулах.

Запишите рассчитанные значения SL и SH на одной миллиметровой бумаге и соедините их, чтобы получить линию «наилучшего соответствия» стандартному раствору. Аналогично запишите UL и UH и соедините их, чтобы получить строку, наиболее подходящую для фрагмента.

При отсутствии каких-либо помех линии должны быть параллельны. Для практических целей линии можно считать параллельными, если значения (SH-SL) и (UH-UL) не отличаются более чем на 10 % от своего среднего значения.

Если окажется, что линии непараллельны, либо u1 и s1, либо u8 и s8 можно отбросить и рассчитать SL, SH, UL и UH с использованием альтернативных формул, чтобы получить альтернативные линии «наилучшего соответствия»:

1.2.3.4 // (a') SL = // 5s1 + 2s2 - s4 6 // или // 5s2 + 2s4 - s8 6 // (b' ) SH = // 5s4 + 2s2 - s1 6 // или / /5с8 + 2с4 – с2 6

и аналогично для UL и UH. Должны соблюдаться те же критерии параллелизма. Тот факт, что результат был рассчитан по трем уровням, должен быть отмечен в итоговом отчете. Если линии считаются параллельными, вычислите логарифм (log A) относительной активности (A) с помощью одной из следующих формул, в зависимости от того, три или четыре уровня использовались для оценки параллельности.

На четыре уровня

1,2 // (в) log A = // (u1 + u2 + u4 + u8 - s1 - s2 - s4 - s8) × 0,602 u4 + u8 + s4 + s8 - u1 - u2 - s1 - s2

На три уровня

1,2 // (d) log A = // (u1 + u2 + u4 - s1 - s2 - s4) × 0,401 u4 + s4 - u1 - s1 // или // // (d' ) log A = // ( и2 + и4 + и8 - с2 - с4 - с8)×0,401 и8 + с8 - и2 - с2

Активность экстракта образца = активность соответствующего стандарта × A

(и8 = s8 × А)

Если обнаруживается, что относительная активность выходит за пределы диапазона от 0,5 до 2,0, повторите анализ, внося соответствующие корректировки в концентрации экстракта или, если это невозможно, в стандартные растворы. Если относительную активность невозможно привести в требуемый диапазон, любой полученный результат следует считать приблизительным, и это следует отметить в итоговом отчете.

Если линии считаются непараллельными, повторите определение. Если параллелизм все еще не достигнут, удовлетворительное определение не получено.

Результат выразите в миллиграммах цинкбацитрацина на килограмм корма.

9. Повторяемость

Разница между результатами двух определений, выполненных на одной и той же пробе одним и тем же аналитиком, не должна превышать:

- 2 мг/кг по абсолютной величине при содержании цинк-бацитрацина до 10 мг/кг,

- 20 % относятся к наивысшему значению для содержания от 10 до 25 мг/кг,

- 5 мг/кг по абсолютной величине для содержания от 25 до 50 мг/кг,

- 10 % относятся к самому высокому значению для содержания выше 50 мг/кг».

(1) 1 мг бацитрацина цинка, предназначенного для корма, эквивалентен 42 международным единицам (в.е.).

(а) Могут использоваться другие методы при условии, что установлено, что они дают аналогичные бактериальные суспензии.

(б) Можно использовать любую коммерческую питательную среду аналогичного состава, дающую такие же результаты.

4.11 . СТАНДАРТНОЕ ВЕЩЕСТВО: ЦИНК БАЦИТРАЦИН ИЗВЕСТНОЙ АКТИВНОСТИ (В I.U.).

5 . СТАНДАРТНЫЕ РЕШЕНИЯ

ВЗВЕСЬТЕ КОЛИЧЕСТВО СТАНДАРТНОГО ЦИНК-БАЦИТРАЦИНА (4.11), СООТВЕТСТВУЮЩЕЕ 1 050 МЕ. (СОГЛАСНО УКАЗАННОЙ ДЕЯТЕЛЬНОСТИ). ДОБАВЬТЕ 5 МЛ 0,1 М СОЛЯНОЙ КИСЛОТЫ (4.7) И ОСТАВЬТЕ НА 15 МИНУТ. ДОБАВЬТЕ 30 МЛ ВОДЫ, ПОДГОТОВЬТЕ PH ДО 4,5 С ПОМОЩЬЮ ФОСФАТНОГО БУФЕРА (4,5) (ОКОЛО 4 МЛ), СОСТАВЬТЕ ВОДОЙ ОБЪЕМ 50 МЛ И ХОРОШО ПЕРЕМЕШАЙТЕ (1 МЛ = 21 МЕ).

ИЗ ЭТОГО РАСТВОРА ПРИГОТОВЬТЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНЫМ РАЗБАВЛЕНИЕМ ФОСФАТНЫМ БУФЕРОМ (4.5) СЛЕДУЮЩИЕ РАСТВОРЫ:

S8 0,42 МЕ/мл

S4 0,21 МЕ/мл

S2 0,105 МЕ/мл

S1 0,0525 МЕ/мл

6 . ПРИГОТОВЛЕНИЕ ЭКСТРАКТОВ И АНАЛИЗА РАСТВОРОВ

6.1 . ЭКСТРАКЦИЯ

6.1.1 . ПРЕМИКСЫ И МИНЕРАЛЬНЫЕ КОРМЫ

ВЗВЕСЬТЕ ОБРАЗЦУ МАССОЙ ОТ 2,0 ДО 5,0 Г, ДОБАВЬТЕ 29,0 МЛ СМЕСИ (4.4) И 1,0 МЛ РАСТВОРА СУЛЬФИДА НАТРИЯ (4.9) И НЕМНОГО ВСТРЯХНИТЕ. ПРОВЕРЬТЕ, ЧТО PH ОКОЛО 2 . ВСТРЯХИВАЙТЕ В ТЕЧЕНИЕ 10 МИНУТ, ДОБАВЬТЕ 30 МЛ ФОСФАТНОГО БУФЕРА (4,5), ВСТРЕЧИВАЙТЕ В ТЕЧЕНИЕ 15 МИНУТ И ЦЕНТРИФУГИРУЙТЕ. Возьмите подходящую аликвоту надосадочного раствора и доведите pH до 6,5 с помощью 1 М раствора гидроксида (4.8) с помощью pH-метра или с помощью раствора бромкрезолового пурпурного (4.10) в качестве индикатора. РАЗБАВЬТЕ ФОСФАТНЫМ БУФЕРОМ (4,5), ЧТОБЫ ПОЛУЧИТЬ ОЖИДАЕМОЕ СОДЕРЖАНИЕ ЦИНК-БАЦИТРАЦИНА 0,42 МЕ/МЛ (= U8).

6.1.2 . БЕЛКОВЫЕ КОНЦЕНТРАТЫ

ВЗВЕСЬТЕ ОБРАЗЦУ ВЕСОМ 10,0 Г, ДОБАВЬТЕ 49,0 МЛ СМЕСИ (4.4) И 1,0 МЛ РАСТВОРА СУЛЬФИДА НАТРИЯ (4.9) И НЕМНОГО ВСТРЯХНИТЕ. ПРОВЕРЬТЕ, ЧТО PH ОКОЛО 2 . ВСТРЯХИВАЙТЕ В ТЕЧЕНИЕ 10 МИНУТ. ДОБАВЬТЕ 50 МЛ ФОСФАТНОГО БУФЕРА (4,5), ВСТРЯХИВАЙТЕ В ТЕЧЕНИЕ 15 МИНУТ И ЦЕНТРИФУГИРУЙТЕ. ВЗЕРЬТЕ ПОДХОДЯЩИЙ ОБЪЕМ ВЕРТИКАЛЬНОГО РАСТВОРА И ДОРИГИНУЙТЕ РН ДО 6,5 С ПОМОЩЬЮ 1 М РАСТВОРА ГИДРОКСИДА НАТРИЯ (4.8) С ПОМОЩЬЮ PH-МЕТРА ИЛИ С ПОМОЩЬЮ БРОМКРЕЗОЛОВОГО ФИОЛЕТОВОГО РАСТВОРА (4.10) В КАЧЕСТВЕ ИНДИКАТОРА. ИСПАРЯТЬ ПРИМЕРНО ПОЛОВИНУ ОБЪЕМА В РОТОРНОМ ИСПАРИТЕЛЕ ПРИ ТЕМПЕРАТУРЕ НЕ ВЫШЕ 35 С.

РАЗБАВЬТЕ ФОСФАТНЫМ БУФЕРОМ (4,5), ЧТОБЫ ПОЛУЧИТЬ ОЖИДАЕМОЕ СОДЕРЖАНИЕ ЦИНК-БАЦИТРАЦИНА 0,42 МЕ/МЛ (= U8).

6.1.3 . ДРУГИЕ ФИДЫ

ВЗВЕСЬТЕ ОБРАЗЦУ В 10,0 Г (20,0 Г ПРИ ОЖИДАЕМОМ СОДЕРЖАНИИ ЦИНК-БАЦИТРАЦИНА 5 МГ/КГ). ДОБАВЬТЕ СМЕСЬ 24,0 МЛ СМЕСИ (4.4) И 1,0 МЛ РАСТВОРА СУЛЬФИДА НАТРИЯ (4.9) И ГОМОГЕНИЗИРУЙТЕ В ТЕЧЕНИЕ 10 МИНУТ. ДОБАВЬТЕ 25 МЛ ФОСФАТНОГО БУФЕРА (4,5), ВСТРЯХИВАЙТЕ В ТЕЧЕНИЕ 15 МИНУТ И ЦЕНТРИФУГИРУЙТЕ. Берут 20 мл надосадочного раствора и доводят pH до 6,5 с помощью 1 М раствора гидроксида натрия (4.8) с помощью pH-метра или с помощью раствора бромкрезолового пурпурного (4.10) в качестве индикатора. ИСПАРЯТЬ В РОТОРНОМ ИСПАРИТЕЛЕ ПРИ ТЕМПЕРАТУРЕ НЕ ВЫШЕ 35 С ДО 4 МЛ. РАЗВЕДИТЕ ОСТАТОК ФОСФАТНЫМ БУФЕРОМ (4,5), ЧТОБЫ ПОЛУЧИТЬ ОЖИДАЕМОЕ СОДЕРЖАНИЕ ЦИНК-БАЦИТРАЦИНА 0,42 МЕ/МЛ (= U8).

6.2 . АНАЛИЗА РЕШЕНИЯ

ИЗ РАСТВОРА U8 ПРИГОТОВЬТЕ РАСТВОРЫ U4 (ОЖИДАЕМОЕ СОДЕРЖАНИЕ: 0,21 МЕ/мл), U2 (ОЖИДАЕМОЕ СОДЕРЖАНИЕ: 0,105 МЕ/мл) И U1 (ОЖИДАЕМОЕ СОДЕРЖАНИЕ: 0,0525 МЕ/мл) ПУТЕМ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОГО РАЗВЕДЕНИЯ (1 + 1). ) С ФОСФАТНЫМ БУФЕРОМ (4.5).

7 . ПРОЦЕДУРА АНАЛИЗА

7.1. ИНОКУЛЯЦИЯ АНАЛИЗА СРЕДЫ

ИНОКУЛИРУЮТ АНАЛИЗАЦИОННУЮ СРЕДУ (4.2) БАКТЕРИАЛЬНОЙ СУСПЕНЗИЕЙ (3.2) ПРИ ТЕМПЕРАТУРЕ ПРИБЛИЗИТЕЛЬНО 50°С. ПУТЕМ ПРЕДВАРИТЕЛЬНЫХ ИСПЫТАНИЙ НА ЧАСТКАХ С АНКЕТНОЙ СРЕДОЙ (4.2) ОПРЕДЕЛИТЕ КОЛИЧЕСТВО БАКТЕРИАЛЬНОЙ СУСПЕНЗИИ, НЕОБХОДИМОЕ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ САМЫХ БОЛЬШИХ И ЧЕТКИХ ЗОН ИНГИБИРОВАНИЯ ПРИ РАЗЛИЧНЫХ КОНЦЕНТРАЦИЯХ ЦИНК-БАЦИТРАЦИНА.

7.2 . ПОДГОТОВКА ПЛАСТИН

ДИФФУЗИЯ ЧЕРЕЗ АГАР ПРОВОДИТСЯ В ЧАСТКАХ С ЧЕТЫРЕМ КОНЦЕНТРАЦИЯМИ СТАНДАРТНОГО РАСТВОРА (S8, S4, S2 И S1) И ЧЕТЫРЕМИ КОНЦЕНТРАЦИЯМИ АНАЛИЗА РАСТВОРА (U8, U4, U2 И U1). ЭТИ ЧЕТЫРЕ КОНЦЕНТРАЦИИ ЭКСТРАКТА И СТАНДАРТА ОБЯЗАТЕЛЬНО ДОЛЖНЫ БЫТЬ РАЗМЕЩЕНЫ В КАЖДОЙ ЧАСТИ. ДЛЯ ЭТОГО ВЫБЕРИТЕ ПЛАСТИНЫ ДОСТАТОЧНО БОЛЬШИЕ, ЧТОБЫ В АГАРНОЙ СРЕДЕ СДЕЛАТЬ НЕ МЕНЕЕ ВОСЕМЬ ОТВЕРСТИЙ ДИАМЕТРОМ ОТ 10 ДО 13 ММ И НЕ МЕНЕЕ 30 ММ МЕЖДУ ЦЕНТРАМИ. ИСПЫТАНИЕ МОЖЕТ ПРОВОДИТЬСЯ НА ПЛАСТИНКАХ, СОСТОЯЩИХ ИЗ ЛИСТА СТЕКЛА С ПОМЕЩЕННЫМ НА ВЕРХУ АЛЮМИНИЕВЫМ ИЛИ ПЛАСТИКОВЫМ КОЛЬЦОМ С ЛИЦОМ, ДИАМЕТРОМ 200 ММ И ВЫСОТОЙ 20 ММ.

НАЛЕЙТЕ В ЧАСТИ КОЛИЧЕСТВО СРЕДЫ ( 4.2 ), ИНОКУЛИРУЕМОЙ КАК ПУНКТ 7.1, ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ СЛОЯ ТОЛЩИНОЙ ОКОЛО 2 ММ ( 60 МЛ ДЛЯ ПЛАСТИНЫ ДИАМЕТРОМ 200 ММ ), ПОЗВОЛЯЙТЕ ЗАСТАТЬ В РОВНОМ ПОЛОЖЕНИИ, ПРОВЕРЬТЕ ОТВЕРСТИЯ И ПОМЕЩАЙТЕ В НИХ ТОЧНО ИЗМЕРЕННЫЕ ОБЪЕМЫ АНАЛИЗА И СТАНДАРТНЫХ РАСТВОРОВ (ОТ 0,10 ДО 0,15 МЛ НА ОТВЕРСТИЕ, В ЗАВИСИМОСТИ ДИАМЕТРА). ПРИМЕНЯЙТЕ КАЖДУЮ КОНЦЕНТРАЦИЯ ПО МИНИМУМ ЧЕТЫРЕ РАЗА, ЧТОБЫ КАЖДОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ БЫЛО ОЦЕНЕНО ПО 32 ЗОНАМ ИНГИБИРОВАНИЯ.

7.3 . ИНКУБАЦИЯ

ИНКУБИРУЙТЕ ЧАСТИ ОТ 16 ДО 18 ЧАСОВ ПРИ 30°С.

8 . ОЦЕНКА

ИЗМЕРЬТЕ ДИАМЕТР ЗОН ТОРМОЖЕНИЯ С точностью до 0,1 ММ. ЗАПИШИТЕ СРЕДНИЕ ИЗМЕРЕНИЯ ДЛЯ КАЖДОЙ КОНЦЕНТРАЦИИ НА ПОЛУЛОГАРИФМИЧЕСКОЙ БУМАГЕ, ПОКАЗЫВАЯ ЛОГАРИФМ КОНЦЕНТРАЦИИ ОТНОСИТЕЛЬНО ДИАМЕТРА ЗОН ИНГИБИРОВАНИЯ. ПОСТРОИТЕ ЛИНИИ НАИЛУЧШЕГО ПОДХОДЯЩЕГО СТАНДАРТНОГО РЕШЕНИЯ И ЭКСТРАКТА, НАПРИМЕР, КАК НИЖЕ:

ОПРЕДЕЛИТЕ ТОЧКУ НАИЛУЧШЕГО СООТВЕТСТВИЯ ДЛЯ СТАНДАРТНОГО НИЗКОГО УРОВНЯ (SL), ИСПОЛЬЗУЯ ФОРМУЛУ:

1.2(А) SL =

7С1+4С2+Сч — 2С8 10

ОПРЕДЕЛИТЕ ТОЧКУ НАИЛУЧШЕГО СООТВЕТСТВИЯ ДЛЯ СТАНДАРТНОГО ВЫСОКОГО УРОВНЯ (SH), ИСПОЛЬЗУЯ ФОРМУЛУ:

1.2(Б) SH =

Хасак + 4S4 + S2 – 2S1 10

ПОХОДНЫМ РАССЧИТАЙТЕ ТОЧКИ НАИЛУЧШЕГО СООТВЕТСТВИЯ ДЛЯ ИЗВЛЕЧЕНИЯ САМОГО НИЗКОГО УРОВНЯ (UL) И ИЗВЛЕЧЕНИЯ САМОГО ВЫСОКОГО УРОВНЯ (UH), ЗАМЕНЯЯ U1, U2, U4 И U8 НА S1, S2, S4 И S8 В ПРИВЕДЕННЫХ ФОРМУЛАХ.

ЗАПИСЬТЕ РАСЧЕТНЫЕ ЗНАЧЕНИЯ SL И SH НА ОДНОЙ БУМАГЕ И СОЕДИНИТЕ ИХ, ЧТОБЫ ПОЛУЧИТЬ ЛИНИЮ НАИЛУЧШЕГО ПОДХОДЯЩЕГО ДЛЯ СТАНДАРТНОГО РЕШЕНИЯ. ТАКЖЕ ЗАПИШИТЕ UL И UH И СОЕДИНИТЕ НИХ, ЧТОБЫ ПОЛУЧИТЬ ЛИНИЮ НАИЛУЧШЕГО ПОДХОДЯЩЕГО ДЛЯ ИЗВЛЕЧЕНИЯ.

ПРИ ОТСУТСТВИИ КАКИХ-ЛИБО ПОМЕХ ЛИНИИ ДОЛЖНЫ БЫТЬ ПАРАЛЛЕЛЬНЫМИ. В ПРАКТИЧЕСКИХ ЦЕЛЯХ ЛИНИИ МОЖНО СЧИТАТЬ ПАРАЛЛЕЛЬНЫМИ, ЕСЛИ ЗНАЧЕНИЯ (SH-SL) И (UH-UL) НЕ ОТЛИЧАЮТСЯ БОЛЬШЕ НА 10% ОТ СРЕДНЕГО ЗНАЧЕНИЯ.

ЕСЛИ ЛИНИИ ОБНАРУЖЕНЫ НЕПАРАЛЛЕЛЬНЫМИ ИЛИ U1 И S1 ИЛИ U8 И S8, МОГУТ БЫТЬ ОТМЕНЕНЫ И РАСЧИТАНЫ SL, SH, UL и UH, С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ АЛЬТЕРНАТИВНЫХ ФОРМУЛ, ДЛЯ ПРЕДОСТАВЛЕНИЯ АЛЬТЕРНАТИВНЫХ ЛИНИИ НАИЛУЧШЕГО СООТВЕТСТВИЯ:

1.2.3.4(А') SL =

5С1 + 2С2 – С4 6

ИЛИ

5С2 + 2С4 – С8 6

( Б' ) SH =

5С4 + 2С2 – С1 6

ИЛИ

Пронзенный + 2S4 - S2 6

И ТАКЖЕ ДЛЯ UL И UH . ДОЛЖНЫ БЫТЬ Удовлетворены одни и те же критерии параллельности. В ОКОНЧАТЕЛЬНОМ ОТЧЕТЕ ДОЛЖЕН БЫТЬ УКАЗАН ТОТ ФАКТ, ЧТО РЕЗУЛЬТАТ БЫЛ РАСЧЕТ ИЗ ТРЕХ УРОВНЕЙ.

КОГДА ЛИНИИ СЧИТАЮТСЯ ПАРАЛЛЕЛЬНЫМИ, ВЫЧИСЛЯЮТ ЛОГАРИФМ (LOG A) ОТНОСИТЕЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ (A) ПО ОДНОЙ ИЗ СЛЕДУЮЩИХ ФОРМУЛ, В ЗАВИСИМОСТИ ОТ ТРИ ИЛИ ЧЕТЫРЕХ УРОВНЕЙ, ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ДЛЯ ОЦЕНКИ ПАРАЛЛЕЛИЗМА.

ДЛЯ ЧЕТЫРЕХ УРОВНЕЙ

1.2(C) LOG A =

( U1 + U2 + U4 + U8 - S1 - S2 - S4 - S8 ) 0,602 U4 + U8 + S4 + S8 - U1 - U2 - S1 - S2

ДЛЯ ТРЕХ УРОВНЕЙ

1.2(D) LOG A =

( U1 + U2 + U4 - S1 - S2 - S4 ) 0,401 U4 + S4 - U1 - S1

ИЛИ //

( D' ) LOG A =

(Аа + W4 + U8 – S2 – S4 – S8) 0,401 Ада + Сакк – Аа – Плохо

АКТИВНОСТЬ ЭКСТРАКТА ОБРАЗЦА = АКТИВНОСТЬ СООТВЕТСТВУЮЩЕГО СТАНДАРТА A

( U8 = S8 А )

ЕСЛИ ОТНОСИТЕЛЬНАЯ АКТИВНОСТЬ ВЫХОДИТ ЗА ДИАПАЗОН ОТ 0,5 ДО 2,0, ПОВТОРИТЕ АНАЛИЗА, ВНЕСЯ СООТВЕТСТВУЮЩУЮ РЕГУЛИРОВКУ КОНЦЕНТРАЦИИ ЭКСТРАКТА ИЛИ, ЕСЛИ ЭТО НЕВОЗМОЖНО, СТАНДАРТНЫХ РАСТВОРОВ. КОГДА ОТНОСИТЕЛЬНУЮ АКТИВНОСТЬ НЕ МОЖЕТ ВВЕСТИ В ТРЕБУЕМЫЙ ДИАПАЗОН, ЛЮБОЙ ПОЛУЧЕННЫЙ РЕЗУЛЬТАТ ДОЛЖЕН СЧИТАТЬСЯ ПРИБЛИЗИТЕЛЬНЫМ И ЭТО СЛЕДУЕТ ОТМЕТИТЬ В ОКОНЧАТЕЛЬНОМ ОТЧЕТЕ.

КОГДА ЛИНИИ СЧИТАЮТСЯ НЕПАРАЛЛЕЛЬНЫМИ, ПОВТОРИТЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ. ЕСЛИ ПАРАЛЛЕЛЬНОСТЬ ЕЩЕ НЕ ДОСТИГНА, ТО УДОВЛЕТВОРИТЕЛЬНОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ НЕ ПОЛУЧЕНО.

ВЫРАЖИТЕ РЕЗУЛЬТАТ В МИЛЛИГРАММАХ ЦИНК-БАЦИТРАЦИНА НА КИЛОГРАММ КОРМОВ.

9 . ПОВТОРЯЕМОСТЬ

РАЗНИЦА МЕЖДУ РЕЗУЛЬТАТАМИ ДВУХ ОПРЕДЕЛЕНИЙ, ПРОВЕДЕННЫХ НА ОДНОЙ ОБРАЗЦЕ ОДНИМ АНАЛИТИКОМ, НЕ ДОЛЖНА ПРЕВЫШАТЬ:

- 2 МГ/КГ, В АБСОЛЮТНОМ ЗНАЧЕНИИ, ПРИ СОДЕРЖАНИИ ЦИНК-БАЦИТРАЦИНА ДО 10 МГ/КГ,

- 20 % ОТНОСЯТСЯ К НАИБОЛЬШЕМУ ЗНАЧЕНИЮ ДЛЯ СОДЕРЖАНИЯ ОТ 10 ДО 25 МГ/КГ,

- 5 МГ/КГ, В АБСОЛЮТНОМ ЗНАЧЕНИИ, ДЛЯ СОДЕРЖАНИЯ ОТ 25 ДО 50 МГ/КГ,

- 10 % ОТНОСЯТСЯ К НАИБОЛЬШЕМУ ЗНАЧЕНИЮ ДЛЯ СОДЕРЖАНИЯ СВЫШЕ 50 МГ/КГ.'

(1) 1 МГ ЦИНКОВОГО БАЦИТРАЦИНА КОРМОВОГО ПРОДУКТА ЭКВИВАЛЕНТНО 42 МЕЖДУНАРОДНЫМ ЕДИНИЦАМ (МЕ).

(А) ДРУГИЕ МЕТОДЫ МОГУТ ИСПОЛЬЗОВАТЬСЯ, ПРИ УСЛОВИИ, ЧТО БЫЛО УСТАНОВЛЕНО, ЧТО ОНИ ДАЮТ ПОХОЖИЕ БАКТЕРИАЛЬНЫЕ СУСПЕНЗИИ.

(B) МОЖЕТ ИСПОЛЬЗОВАТЬСЯ ЛЮБАЯ КОММЕРЧЕСКАЯ КУЛЬТУРНАЯ СРЕДА ПОХОЖЕГО СОСТАВА, ДОСТУПНАЯ ТО ЖЕ РЕЗУЛЬТАТАМ.