Директива Комиссии 92/95/EEC от 9 ноября 1992 г., вносящая поправки в Приложение к Седьмой Директиве 76/372/EEC, устанавливающая методы Сообщества анализа для официального контроля кормов.

ДИРЕКТИВА КОМИССИИ 92/95/EEC от 9 ноября 1992 г., вносящая поправки в Приложение к Седьмой Директиве 76/372/EEC, устанавливающая методы анализа Сообщества для официального контроля кормов

КОМИССИЯ ЕВРОПЕЙСКИХ СООБЩЕСТВ,

Принимая во внимание Договор о создании Европейского экономического сообщества,

Принимая во внимание Директиву Совета 70/373/EEC от 20 июля 1970 г. о введении методов Сообщества по отбору проб и анализу для официального контроля кормов (1), с последними поправками, внесенными Актами о присоединении Испании и Португалии, и, в частности, Статья 2 этого документа,

Принимая во внимание, что Седьмая Директива Комиссии 76/372/EEC от 1 марта 1976 г., устанавливающая методы Сообщества анализа для официального контроля кормов (2), с поправками, внесенными Директивой 81/680/EEC (3), предписывает методы, которые должны использоваться для определение афлатоксина В1;

Принимая во внимание, что имеются основания для адаптации этих методов с учетом достижений научно-технических знаний; поскольку особенно желательно иметь метод контроля очень низких пределов содержания афлатоксина, установленных Директивой Совета 74/63/EEC от 17 декабря 1973 г. об установлении максимально разрешенных уровней нежелательных веществ и продуктов в питании животных (4), с последними поправками, внесенными Директивой 91/132/EEC (5);

При этом желательно также иметь в наличии метод определения афлатоксина В1 в присутствии мешающих веществ, например мякоти цитрусовых;

Поскольку меры, предусмотренные настоящей Директивой, соответствуют мнению Постоянного комитета по кормам,

ПРИНЯЛ НАСТОЯЩУЮ ДИРЕКТИВУ:

Статья 1

В Приложение к Директиве 76/372/EEC вносятся поправки в соответствии с Приложением к настоящей Директиве.

Статья 2

Государства-члены должны ввести в силу не позднее 1 октября 1993 г. законы, правила и административные положения, необходимые для соблюдения положений настоящей Директивы. Они должны немедленно проинформировать об этом Комиссию.

Когда государства-члены ЕС принимают эти положения, они должны содержать ссылку на настоящую Директиву или сопровождаться такой ссылкой во время их официальной публикации. Порядок такой ссылки утверждается государствами-членами.

Статья 3

Данная Директива адресована государствам-членам. Совершено в Брюсселе 9 ноября 1992 года. За Комиссию.

Рэй Мак Шарри

Член Комиссии

(1) ОЖ № L 170, 3.8.1970, с. 2. (2) ОЖ № L 102, 15. 4. 1976, с. 8. (3) ОЖ № L 246, 29. 8. 1981, с. 32. (4) ОЖ № L 38, 11. 2. 1974, с. 31. (5) ОЖ № L 66, 13.3.1991, с. 16.

ПРИЛОЖЕНИЕ

I. В части А «Метод одномерной тонкослойной хроматографии» текст в пункте 1 «Цель и область применения» заменяется следующим текстом:

'1. Цель и сфера применения

Метод позволяет определять уровень афлатоксина В1 в сырье и прямых кормах. Этот метод нельзя применять при наличии мякоти цитрусовых. Нижний предел определения — 0,01 мг/кг (10 частей на миллиард).

При наличии мешающих веществ необходимо повторить анализ методом Б (высокоэффективная жидкостная хроматография).

II. В части Б «Метод двумерной тонкослойной хроматографии» текст заменяется следующим:

'Б. ОПРЕДЕЛЕНИЕ АФЛАТОКСИНА В1. ВЫСОКОЭФФЕКТИВНЫЙ ЖИДКОСТЬ ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИЙ МЕТОД

1. Цель и область применения. Этот метод предназначен для определения афлатоксина В1 в кормах для животных, в том числе содержащих мякоть цитрусовых. Нижний предел определения составляет 0,001 мг/кг (1 ppb). 2. Принцип. Пробу экстрагируют хлороформом. Экстракт фильтруют и аликвотную часть очищают на картридже Florisil, а затем на картридже C18. Окончательное разделение и определение достигается с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с использованием обращенно-фазовой колонки C18 с последующей постколоночной дериватизацией йодом в воде и флуоресцентным детектированием. Примечание: микотоксины являются чрезвычайно токсичными веществами. Манипуляции следует проводить в специально отведенном для этого вытяжном шкафу. Особые меры предосторожности следует принимать, когда токсины находятся в сухой форме из-за их электростатической природы и, как следствие, склонности к рассеиванию в рабочих зонах. 3. Реагенты 3.1. Хлороформ, стабилизированный 0,5–1,0 % этанола по массе. См. наблюдение 10.2. 3.2. Метанол, марка ВЭЖХ для преатации 3,6. 3.3. Ацетон. 3.4. Ацетонитрил, сорт для ВЭЖХ. 3.5. Элюирующие растворители: подготовьте за день до использования или удалите воздух из растворителей ультразвуком. 3.5.1. Смесь ацетона (3.3) и воды, 98+2 (об+об). 3.5.2. Смесь воды и метанола (3.2), 80+20 (об+об). 3.5.3. Смесь воды и ацетона (3.3), 85+15 (об+об). 3.6. Подвижная фаза для ВЭЖХ Смесь воды, метанола (3.2) и ацетонитрила (3.4), 130+70+40 (об+об+об). Примечание. Состав растворителя подвижной фазы может потребоваться скорректировать в зависимости от характеристик используемой колонки для ВЭЖХ. 3.7. Насыщенный раствор йода: в 400 мл воды добавить 2 г йода. Перемешивают не менее 90 мин и фильтруют через мембранный фильтр (4.15). Защищайте насыщенный раствор от света, чтобы предотвратить фотодеградацию. 3.8. Промытый кислотой Celite 545 или его эквивалент. 3.9. Картридж Florisil (Waters SEP-PAK) или аналогичный. 3.10. Картридж C18 (Waters SEP-PAK) или аналогичный. 3.11. Инертный газ, напр. азот. 3.12. Стандартный раствор афлатоксина В1 в хлороформе, концентрация 10 мг/мл. Концентрацию раствора проверяют следующим образом: определяют спектр поглощения раствора в диапазоне 330–370 нм с помощью спектрофотометра (4.23). Измерьте поглощение (А) при максимуме около 363 нм. Концентрацию афлатоксина В1 рассчитайте в микрограммах на миллилитр раствора по формуле: Концентрация (мг/мл) = 312 × А × 1000.

22 300 = 13 991 × А 3.12.1. Стандартный раствор афлатоксина В1 в хлороформе. 2,5 мл стандартного раствора афлатоксина В1 (3.12) количественно переносят в мерную колбу вместимостью 50 мл и доводят до метки хлороформом (3.1). Храните этот раствор в прохладном месте (4 °C) в темноте, хорошо запечатанным и завернутым в алюминиевую фольгу. 3.13. Калибровочные растворы афлатоксина B1 ВЭЖХ. Примечание. Для приготовления растворов используйте стеклянную посуду, промытую кислотой (см. 4, Аппаратура). 3.13.1. Калибровочный раствор 4нг/мл. Дайте мерной колбе с исходным стандартным раствором (3.12.1) нагреться до комнатной температуры в алюминиевой фольге (несколько часов). 400 мл исходного стандартного раствора (200 нг афлатоксина В1) переносят в мерную колбу вместимостью 50 мл и упаривают раствор досуха в токе чистого газа (3.11). Полученный остаток растворяют примерно в 20 мл смеси воды с ацетоном (3.5.3), доводят смесью воды с ацетоном до метки и хорошо перемешивают. 3.13.2. Калибровочный раствор 3 нг/мл. Количественно 7,5 мл калибровочного раствора (3.13.1) переносят в мерную колбу вместимостью 10 мл, доводят до метки смесью воды с ацетоном (3.5.3) и хорошо перемешивают. 3.13.3. Калибровочный раствор, 2 нг/мл. Количественно 25 мл калибровочного раствора (3.13.1) переносят в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводят до метки смесью воды с ацетоном (3.5.3) и хорошо перемешивают. Этот раствор также называют эталонным стандартом и используют для многократного введения во время ВЭЖХ (5.5). 3.13.4. Калибровочный раствор 1 нг/мл. Количественно 2,5 мл калибровочного раствора (3.13.1) переносят в мерную колбу вместимостью 10 мл, доводят до метки смесью воды с ацетоном (3.5.3) и хорошо перемешивают. 3.14. Ампула, содержащая смесь афлатоксинов В1, В2, G1 и G2 в концентрациях примерно 1, 0,5, 1 и 0,5 мг/мл соответственно, в 1 мл хлороформа. 3.14.1. Хроматографический тестовый раствор. Содержимое ампулы (3.14) переносят в пробирку со стеклянной пробкой или флакон с завинчивающейся крышкой. Переносят 40 мл этого раствора в пробирку со стеклянной пробкой (промытую кислотой) (4.22). Хлороформ выпаривают в токе инертного газа (3.11) и растворяют в 10 мл смеси воды с ацетоном (3.5.3). 3.15. Реагенты для подтверждающего теста (6). 3.15.1. Насыщенный раствор хлорида натрия. 3.15.2. Сульфат натрия, безводный, гранулированный. 4. Аппаратура. Внимание: использование стеклянной посуды, не промытой кислотой, для водных растворов афлатоксина может привести к потерям. Особую осторожность следует проявлять с новой стеклянной посудой и одноразовой стеклянной посудой, такой как флаконы для автосамплеров и пипетки Пастера. Поэтому лабораторную посуду, контактирующую с водными растворами афлатоксинов, следует замачивать в разбавленной кислоте (например, серной кислоте = 2 моль/л) на несколько часов, затем хорошо промывать дистиллированной водой для удаления всех следов кислоты (например, трижды, проверить с помощью pH-бумага). На практике такая обработка необходима для круглодонных колб (4.4), мерных колб, мерных цилиндров, флаконов или трубок, используемых для калибровочных растворов и конечных экстрактов (особенно флаконов для автосамплеров), а также пипеток Пастера, если они используются для переноса проб. калибровочные растворы или экстракты. 4.1. Мельница-миксер. 4.2. Сито с размером отверстий 1,0 мм (ISO R 565). 4.3. Механический шейкер. 4.4. Роторный вакуумный испаритель, оснащенный круглодонной колбой объемом от 150 до 250 мл. 4.5. Высокоэффективный жидкостный хроматограф, инжектор с петлей, подходящей для введения 250 мл. См. инструкции производителя для частичного или полного заполнения контура. 4.6. Аналитическая колонка ВЭЖХ: насадка C18 3 мм или 5 мм. 4.7. Безимпульсный насос для подачи йодного реагента после колонки. 4.8. Тройник Valco с нулевым мертвым объемом, нержавеющая сталь (1/16 дюйма × 0,75 мм). 4.9. Спиральная реактивная катушка: тефлон или нержавеющая сталь. Размеры от 3 000 × 0,5 мм до 5 000 × 0,5 мм были определены. признано целесообразным в сочетании с колонками для ВЭЖХ диаметром 5 или 3 мм. 4.10. Водяная баня с термостатическим контролем, отрегулированная до 60 °С, способная регулировать температуру с точностью выше 0,1 °С. 4.11. Флуоресцентный детектор с возбуждением при длине волны 365 нм. и излучение с длиной волны 435 нм. (Для прибора с фильтром: длина волны излучения > 400 нм). Должно быть возможно обнаружение не менее 0,05 нг афлатоксина B1. Может быть целесообразным некоторое противодавление (например, ограничитель, катушка из тефлона или нержавеющей стали, подключенная к выход детектора) для подавления пузырьков воздуха в проточной ячейке 4.12 Ленточный самописец 4.13 Электронный интегратор (опция) 4.14 Диаметр рифленой фильтровальной бумаги: 24 см, Macherey-Nagel 617 1/4 или эквивалент 4.15.Мембранный фильтр с размером пор 0,45 мм, Millipore HAWP 04700 или аналогичный.4.16. Коническая колба со стеклянной пробкой емкостью 500 мл. 4.17. Стеклянная колонка (внутренний диаметр около 1 см, длина около 30 см), оснащенная наконечником Люэра. 4.18. Запорный кран Люэра, устойчивый к хлороформу (например, Bio-rad 7328017, Analytichem A1 6078, J.T. Baker 4514 или аналогичный). 4.19. Химически стойкий шприц с разъемом Люэра емкостью 10 мл. 4.20. Шприц, подходящий для инъекции ВЭЖХ, объемом 250 мл (см. 4.5). 4.21. Микрошприц емкостью 100 мл для приготовления калибровочных растворов (проверьте точность в пределах 2 % путем взвешивания). 4.22. Калиброванные пробирки емкостью 10 мл со стеклянными пробками. 4.23. Спектрофотометр, подходящий для проведения измерений в УФ-области спектра. 4.24. Оборудование для подтверждающего испытания (6). 4.24.1. Промываемая кислотой делительная воронка емкостью 100 мл с тефлоновым краном. 4.24.2. Нагревательный блок, от 40 до 50 °C. 5. Процедура 5.1. Подготовка образца. Измельчите пробу так, чтобы она прошла через сито (4.2). 5.2. Тестовая часть. В коническую колбу (4.16) отвешивают 50 г подготовленной испытуемой пробы. 5.3. Экстракция К навеске (5.2) добавляют 25 г целита (3.8), 250 мл хлороформа (3.1) и 25 мл воды. Закрывают колбу пробкой и встряхивают на механическом шейкере (4.3) в течение 30 мин. Фильтруют через рифленый бумажный фильтр (4.14). Соберите 50 мл фильтрата. При необходимости отбирают аликвоту фильтрата и доводят ее до 50 мл хлороформом так, чтобы концентрация афлатоксина В1 не превышала 4 нг/мл. 5.4. Уборка (процедуру следует проводить без существенных перерывов). Внимание: - защитите лабораторию, в которой проводятся анализы, от дневного света. Этого можно эффективно достичь, используя:

(1) Эгмонд, Х.П. ван, Хейстеркамп, С.Х. и Паульш, В.Е. (1991). Пищевые добавки и загрязнители 8, 17-29.

(2) ИСО 3534-1977.

(3) ОЖ № L 351, 2.12.1989, с. 39.

(i) пленка, поглощающая УФ-излучение, на окнах в сочетании с приглушенным светом (без прямых солнечных лучей); (ii) Шторы или жалюзи в сочетании с искусственным освещением (допускаются люминесцентные лампы); - Растворы, содержащие афлатоксин, необходимо максимально защищать от света (хранить в темноте, использовать алюминиевую фольгу). 5.4.1. Очистка Флорисила СЭП-ПАК 5.4.1.1. Подготовка узла колонки с картриджем. Прикрепите запорный кран (4.18) к более короткому штоку картриджа Florisil (3.9) (см. рисунок 1). Промойте картридж и удалите добавку, взяв 10 мл хлороформа (3.1) и быстро пропустив 8 мл через кран через картридж с помощью шприца (4.19). Присоедините более длинную ножку картриджа к стеклянной колонке (4.17) и пропускайте 2 мл хлороформа через картридж в колонку. Закройте кран. Удалите шприц. 5.4.1.2. Очистка Добавьте фильтрат, собранный в 5.3, в узел колонка-картридж и слейте самотеком. Промывают 5 мл хлороформа (3.1), затем 20 мл метанола (3.2). Отбросьте элюаты. Во время этих операций следите за тем, чтобы узел колонка-картридж не высыхал. Афлатоксин В1 элюируют 40 мл водно-ацетоновой смеси (3.5.1) и весь элюат собирают в круглодонную колбу ротационного испарителя (4.4). Концентрируют элюат на роторном испарителе при температуре от 40°C до 50°C до тех пор, пока ацетон не перестанет отгоняться. (Примечание: в этот момент в колбе остается примерно 0,5 мл жидкости. Эксперименты показали, что дальнейшее испарение не является вредным и что, когда остается 0,5 мл жидкости, значительного количества ацетона не остается. Остатки ацетона могут приводят к потерям афлатоксина В1 на картридже С18) Добавляют 1 мл метанола (3.2), вращают колбу до растворения афлатоксина В1 по стенкам колбы, добавляют 4 мл воды и перемешивают. Отсоедините и выбросьте картридж. Промойте стеклянную колонку водой и оставьте для стадии очистки C18. 5.4.2. Очистка С18 СЭП-ПАК 5.4.2.1. Подготовка узла колонка-картридж. Прикрепите кран (4.18) к более короткому штоку картриджа C18 (3.10) (см. рисунок 1). Заправьте картридж и удалите весь воздух, быстро пропуская 10 мл метанола (3.2) через запорный кран через картридж с помощью шприца (4.19) (Пузырьки воздуха в картридже видны в виде светлых пятен на сероватом фоне). Возьмите 10 мл воды и пропустите 8 мл через картридж (Избегайте попадания воздуха в картридж при переходе с метанола на воду). Прикрепите более длинный стержень картриджа к стеклянной колонке (4.17) и пропустите оставшиеся 2 мл воды через картридж в колонке. Закройте кран. Удалите шприц. 5.4.2.2. Очистка Количественно переносят экстракт, собранный в 5.4.1.2, в стеклянную колонку (4.17), дважды промывая колбу 5 мл смеси воды и метанола (3.5.2) и сливают под действием силы тяжести. Во время этих операций следите за тем, чтобы узел колонка-картридж не высыхал. (Когда в сужении рядом с картриджем появятся пузырьки воздуха, остановите поток и постучите по верхней части стеклянной колонны, чтобы удалить пузырьки воздуха. Затем продолжайте). Элюируйте 25 мл смеси воды/метанола. Выбросьте элюат. Элюируйте афлатоксин В1 50 мл смеси воды с ацетоном (3.5.3) и собирайте весь элюат в мерную колбу вместимостью 50 мл. Доводят водой до метки и перемешивают: полученный исследуемый раствор используют для хроматографии (5.5). Внимание: Фильтрация конечного экстракта перед ВЭЖХ обычно не требуется. При необходимости не следует использовать целлюлозные фильтры, поскольку они могут привести к потерям афлатоксина B1. Тефлоновые фильтры приемлемы. 5.5. Высокоэффективная жидкостная хроматография (настройку оборудования см. на рисунке 2). Выделите достаточно времени для кондиционирования и стабилизации инструментов. Примечание 1: Скорости потоков подвижной фазы и реагента после колонки являются лишь ориентировочными. Возможно, их потребуется отрегулировать в зависимости от характеристик колонки ВЭЖХ. Примечание 2: Реакция детектора на афлатоксин B1 зависит от температуры, поэтому необходимо компенсировать дрейф (см. Рисунок 3). Вводя фиксированное количество эталонного стандарта афлатоксина В1 (3.13.3) через регулярные промежутки времени (т.е. каждую третью инъекцию), пиковые значения афлатоксина В1 между этими эталонными стандартами можно корректировать с использованием среднего отклика при условии, что разница между ответами последовательных эталонные стандарты очень малы (< 10 %). Поэтому инъекции необходимо производить без перерывов. Если перерыв необходим, последняя инъекция перед прерыванием и первая инъекция после перерыва должны быть эталонным стандартом (3.13.3). Поскольку калибровочная кривая является линейной и проходит через начало координат, количество афлатоксина B1 в экстрактах проб определяется непосредственно путем сравнения с соседними стандартами. 5.5.1. Настройки насоса ВЭЖХ Настройте насос ВЭЖХ (4.5) на подачу потока 0,5 или 0,3 мл/мин для колонки ВЭЖХ диаметром 5 или 3 мм (4.6) соответственно, используя подвижную фазу (3.6). 5.5.2. Настройки постколоночного насоса Настройте насос (4.7) на подачу 0,2–0,4 мл/мин водного раствора, насыщенного йодом (3.7). В качестве приблизительного ориентира: потоки примерно 0,4 или 0,2 мл/мин желательны в сочетании с потоками подвижной фазы 0,5 и 0,3 мл/мин (3.6) соответственно. 5.5.3. Детектор флуоресценции Установите детектор флуоресценции (4,11) в положение exc. = 365 нм и em = 435 нм (прибор-фильтр; > 400 нм). Отрегулируйте аттенюатор детектора так, чтобы получить отклонение ручки самописца примерно на 80 % от полной шкалы для 1 нг афлатоксина B1. 5.5.4. Инжектор. Для всех растворов впрыскивайте по 250 мл, следуя инструкциям производителя инжектора. 5.5.5. Проверка хроматографического разделения

Вводят хроматографический тест-раствор (3.14.1). Впадины должны составлять менее 5 % суммы высот соседних пиков. 5.5.6. Проверка стабильности системы. Перед каждой серией анализов соответственно вводят эталонный стандарт (3.13.3) до достижения стабильных площадей пиков (Примечание. Пиковые реакции афлатоксина В1 между последовательными инъекциями не должны отличаться более чем на 6 %). Немедленно приступайте к проверке линейности (5.5.7). 5.5.7. Проверка линейности. Введите калибровочные растворы афлатоксина В1 (3.13.1–3.13.4). При каждой третьей инъекции используйте эталонный стандарт (3.13.3) для коррекции дрейфа реакции (Примечание. Пиковые отклики для этого эталонного стандарта не должны отличаться более чем на 10 % за 90 минут). Скорректируйте дрейф согласно формуле в 7. Калибровочный график должен быть линейным и проходить через начало координат с точностью до удвоенной стандартной ошибки Y-оценки. Найденные значения не должны отличаться более чем на 3 % от номинальных значений. Если эти требования выполнены, продолжайте без промедления. В противном случае определите и устраните источники проблемы, прежде чем продолжить. 5.5.8. Введение экстрактов проб Вводят очищенные экстракты проб (5.4.2.2). После каждых двух экстрактов проб повторяют введение стандартного образца (3.13.3) в следующей последовательности: стандартный образец, экстракт, экстракт, стандартный стандарт, экстракт, экстракт, стандартный образец и т. д. 6. Подтверждающий тест 6.1. Дальнейшая обработка экстракта (5.4.2.2) К конечному экстракту, полученному в 5.4.2.2, добавляют 5 мл раствора хлорида натрия (3.15.1). Экстрагируют трижды по 2 мл хлороформа (3.1) в течение одной минуты в разделительной камере. воронка (4.24.1). Объединенные хлороформенные экстракты выливают примерно к 1 г сульфата натрия (3.15.2) в пробирку вместимостью 10 мл. Можно использовать небольшую воронку (диаметр: 4 см), поместив в сужение кусочек ваты, покрытый примерно 1 г сульфата натрия. Промойте слой сульфата натрия несколькими мл хлороформа и соберите смыв в ту же пробирку. Хлороформный экстракт упаривают досуха в той же пробирке с помощью нагревательного блока (4.24.2) и повторно растворяют в 1 мл хлороформа. 6.2. Подготовка производной и тонкослойной хроматографии: См. Приложение к Директиве Совета 76/372/EEC, метод A, пункт 5.6.2. 7. Подсчет результатов Рассчитайте содержание афлатоксина В1 (мм/кг), присутствующего в образце, по формуле: Содержание афлатоксина В1 в мг/кг = m × Ve x t

Vm × M × Vf Vc, где: m = количество афлатоксина B1 в нг, представленное пиком B1 образца, рассчитанное следующим образом: m = P (образец)

P (st1) + P (st2) × 2 r (st) P (образец) = площадь пика афлатоксина B1 для образца P (st1) = площадь пика афлатоксина B1, полученного в результате предшествующего введения эталонного стандарта (3.13.3) ) P (st2) = площадь пика афлатоксина B1 в результате последующего введения эталонного стандарта (3.13.3) r (st) = введенное количество афлатоксина B1 в эталонном стандарте (3.13.3) в нг Vm = объем введенный экстракт пробы в мл Ve x t = конечный объем экстракта пробы в мл с учетом любого произведенного разведения (5.3) M = масса пробы в г Vf = объем фильтрата, перенесенного в картридж Florisil (5.4.1.2) в мл Vc = объем хлороформа, использованный для экстракции образца в мл. Если следовать процедуре, как описано в этом протоколе, формула сокращается до: содержание афлатоксина B1 в мг/кг = 20 × m. 7.1. Расчеты результатов также могут быть выполнены путем измерения высоты пика. 8. Повторяемость: см. 10.1. 9. Воспроизводимость: см. 10.1. 10. Наблюдения 10.1. Точность Совместное исследование (1), проведенное на международном уровне по комбикормам, дало результаты по повторяемости и воспроизводимости, указанные в Таблице 1. Используемый здесь термин повторяемость (r) определяется как наибольшее соотношение, которое не является значимым при Уровень вероятности 95 % для сравнения двух показаний одного и того же образца в одной лаборатории и в аналогичных условиях. Термин воспроизводимость (R) аналогичным образом определяется для сравнения двух разных лабораторий. В соответствии со стандартом ISO 3534-1977, 2.35 (2) и решением Комиссии 89/610/EEC (3) r и R также приведены в таблице 1 в виде коэффициентов вариации. Таблица 1. Повторяемость (r) и воспроизводимость (R), выраженные в виде соотношений и соответствующих коэффициентов вариации (15 лабораторий) Уровень r R CVr (*) CVR (мг/кг) (%) (%) 8 и 14 1,4 1, 7 11 18 (*) CV = коэффициент вариации 10.2. Стабилизация хлороформа (3.1) Адсорбционные характеристики картриджа с флорисилом могут быть изменены, если используются стабилизаторы, отличные от этанола. Это следует проверить в соответствии с 10.3, если описанный хлороформ недоступен. 10.3. Точность Правильное применение метода должно быть проверено повторными измерениями на сертифицированных эталонных материалах. Если они недоступны, эффективность метода следует проверить путем экспериментов по восстановлению, проведенных на обогащенных холостых образцах. Отклонение среднего значения от фактического значения, выраженное в процентах от фактического значения, не должно выходить за пределы от 20 до +10 %. Рисунок 1: Сборка колонка-картридж 1. Подвижная фаза

2. Насос

3. Инжекторный клапан

4. Сторожевая колонна

5. Аналитическая колонка ВЭЖХ.

6. Насыщенный раствор йода.

7. Насос для реагента 8. Т-образное соединение

9. Ванна с термостатом.

10. Спиральная реактивная катушка.

11. Детектор флуоресценции.

12. Ограничитель

13. Отходы

14. Ленточный регистратор/интегратор Рис. 2. Блок-схема системы ЖХ со средним значением отклика соседних колонок после дериватизации йода.

эталонные стандарты время эталонный стандартный экстракт (или калибрант) экстракт (или калибрант) эталонный стандартный экстракт (или калибрант) Рисунок 3: Компенсация дрейфа реакции на афлатоксин B1 путем введения эталонного стандарта (3.13.3) через регулярные промежутки времени