Двенадцатая Директива Комиссии 93/117/EC от 17 декабря 1993 г., устанавливающая методы анализа Сообщества для официального контроля кормов.

ДИРЕКТИВА ДВЕНАДЦАТОЙ КОМИССИИ 93/117/EC от 17 декабря 1993 г., устанавливающая методы анализа Сообщества для официального контроля кормов

КОМИССИЯ ЕВРОПЕЙСКИХ СООБЩЕСТВ,

Принимая во внимание Договор о создании Европейского сообщества,

Принимая во внимание Директиву Совета 70/373/EEC от 20 июля 1970 г. о введении методов Сообщества отбора проб и анализа для официального контроля кормов (1), с последними поправками, внесенными Регламентом (EEC) № 3768/85 (2), и, в частности, статью 2 этого документа,

Принимая во внимание, что Директива 70/373/EEC требует, чтобы официальный контроль кормов с целью проверки соответствия требованиям, вытекающим из положений о качестве и составе, установленных законом, постановлением или административными действиями, проводился с использованием методов отбора проб и анализа Сообщества;

Принимая во внимание, что методы анализа Сообщества для добавок робенидина и метилбензоквата должны быть установлены для использования при проверке соблюдения условий их использования в кормах для животных;

Поскольку меры, предусмотренные настоящей Директивой, соответствуют мнению Постоянного комитета по кормам,

ПРИНЯЛ НАСТОЯЩУЮ ДИРЕКТИВУ:

Статья 1

Государства-члены должны требовать, чтобы анализы, проводимые в ходе официальных проверок кормов для определения содержания в них робенидина и метилбензоквата, проводились с использованием методов, описанных в Приложении к настоящему документу.

Статья 2

Государства-члены должны ввести в действие законы, правила и административные положения, необходимые для соблюдения настоящей Директивы, не позднее 30 ноября 1994 г. и немедленно проинформировать об этом Комиссию.

Когда государства-члены ЕС принимают эти положения, они должны содержать ссылку на настоящую Директиву или сопровождаться такой ссылкой во время их официальной публикации. Порядок такой ссылки должен быть принят государствами-членами.

Статья 3

Настоящая Директива вступает в силу на третий день после ее публикации в Официальном журнале Европейских сообществ.

Совершено в Брюсселе 17 декабря 1993 года.

Для Комиссии

Рене ШТАЙХЕН

Член Комиссии

(1) ОЖ № L 170, 3.8.1970, с. 2.

(2) ОЖ № L 362, 31.12.1985, с. 8.

ПРИЛОЖЕНИЕ

1. ОПРЕДЕЛЕНИЕ РОБЕНИДИНА 1,3-бис[(4-хлорбензилиден)амино]гуанидин-гидрохлорида

1. Цель и сфера применения

Этот метод предназначен для определения робенидина в кормах. нижний предел определения — 5 мг/кг.

2. Принцип

Пробу экстрагируют подкисленным метанолом. Экстракт сушат и аликвотную часть очищают на колонке с оксидом алюминия. Робенидин элюируют из колонки метанолом, концентрируют и доводят до подходящего объема подвижной фазой. Содержание робенидина определяют методом обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с использованием УФ-детектора.

3. Реагенты

3.1. Метанол

3.2. Подкисленный метанол

4,0 мл соляной кислоты (Р20с, 1,18 г/мл) переносят в градуированную колбу вместимостью 500 мл, доводят до метки метанолом (3.1) и перемешивают. Этот раствор должен быть свежеприготовленным перед использованием.

3.3. Ацетонитрил, сорт для ВЭЖХ

3.4. Молекулярная решетка

Тип 3А, бусины от 8 до 12 меш (гранулы 1,6-2,5 мм, кристаллический алюмосиликат, диаметр пор 0,3 мм)

3.5. Оксид алюминия: класс кислотной активности I для колоночной хроматографии.

Переложите 100 г оксида алюминия в подходящую емкость и добавьте 2,0 мл воды. Закройте пробкой и встряхивайте примерно 20 минут. Хранить в хорошо закупоренной таре.

3.6. Раствор дигидрофосфата калия, с = 0,025 моль/л

Растворите 3,40 г дигидрофосфата калия в воде (класса ВЭЖХ) в градуированной колбе емкостью 1000 мл, доведите до метки и перемешайте.

3.7. Раствор гидрофосфата натрия, c = 0,025 моль/л

Растворите 3,55 г безводного (или 4,45 г дигидрата или 8,95 г додекагидрата) гидрофосфата натрия в воде (класс ВЭЖХ) в градуированной колбе емкостью 1000 мл, доведите до метки и перемешайте.

3.8. ВЭЖХ подвижная фаза

Смешайте следующие реагенты:

650 мл ацетонитрила (3,3),

250 мл воды (класса ВЭЖХ),

50 мл раствора дигидрофосфата калия (3.6),

50 мл раствора гидрофосфата натрия (3.7).

Фильтруют через фильтр с диаметром пор 0,22 мм (4.6) и дегазируют раствор (например, ультразвуком в течение 10 минут).

3.9. Стандартное вещество

Робенидин чистый: 1,3-бис[4-хлорбензилиден)амино]гуанидин гидрохлорид, E 750.

3.9.1. Стандартный раствор робенидина: 300 мг/мл:

Взвешивают с точностью до 0,1 мг, 30 мг стандартного вещества робенидина (3.9). Растворяют в подкисленном метаноле (3.2) в мерной колбе вместимостью 100 мл, доводят до метки тем же растворителем и перемешивают. Оберните колбу алюминиевой фольгой и храните в темном месте.

3.9.2. Промежуточный стандартный раствор робенидина: 12 мг/мл.

10,0 мл исходного стандартного раствора (3.9.1) переносят в градуированную колбу вместимостью 250 мл, доводят до метки подвижной фазой (3.8) и перемешивают. Оберните колбу алюминиевой фольгой и храните в темном месте.

3.9.3. Калибровочные решения

В серию калиброванных колб вместимостью 50 мл переносят по 5,0, 10,0, 15,0, 20,0 и 25,0 мл раствора промежуточного стандарта (3.9.2). Доведите до метки подвижной фазой (3,8) и перемешайте. Эти растворы соответствуют 1,2, 2,4, 3,6, 4,8 и 6,0 мг/мл робенидина соответственно. Эти растворы должны быть свежеприготовленными перед применением.

4. Аппарат

4.1. Стеклянная колонна

Изготовлен из янтарного стекла, оснащен запорным краном и резервуаром емкостью около 150 мл, внутренний диаметр от 10 до 15 мм, длина 250 мм.

4.2. Лабораторный шейкер на запястье

4.3. Ротационный пленочный испаритель

4.4. Оборудование для ВЭЖХ с ультрафиолетовым детектором с переменной длиной волны или детектором на диодной матрице, работающим в диапазоне от 250 до 400 мм.

4.4.1. Жидкостная хроматографическая колонка: 300 мм × 4 мм, C18, упаковка 10 мм или эквивалентная.

4.5. Фильтровальная бумага из стекловолокна (Whatman GF/A или эквивалент)

4.6. Мембранные фильтры, 0,22 мм

4.7. Мембранные фильтры, 0,45 мм

5. Процедура

Примечание. Робенидин чувствителен к свету. Во всех операциях следует использовать посуду янтарного цвета.

5.1. Общий

5.1.1. Холостой корм следует проанализировать на предмет отсутствия в нем ни робенидина, ни мешающих веществ.

5.1.2. Тест на восстановление следует проводить путем анализа контрольного корма (5.1.1), обогащенного добавлением робенидина в количестве, аналогичном тому, которое присутствует в образце. Для обогащения до уровня 60 мг/кг переносят 3,0 мл исходного стандартного раствора (3.9.1) в коническую колбу вместимостью 250 мл. Выпарить раствор до c. 0,5 мл в токе азота. Добавьте 15 г чистого корма, перемешайте и подождите 10 минут, прежде чем приступить к этапу экстракции (5.2).

Примечание: для целей данного метода холостой корм должен быть аналогичен типу образца, и при анализе не должен обнаруживаться робенидин.

5.2. Добыча

Взвесьте с точностью до 0,01 г примерно 15 г приготовленной пробы. Переносят в коническую колбу вместимостью 250 мл, добавляют 100,0 мл подкисленного метанола (3.2), закрывают пробкой и встряхивают в течение одного часа на шейкере (4.2). Фильтруют раствор через фильтровальную бумагу из стекловолокна (4.5) и собирают весь фильтрат в коническую колбу вместимостью 150 мл. Добавьте 7,5 г молекулярного сита (3.4), пробку и встряхивайте в течение пяти минут. Немедленно отфильтровать через фильтровальную бумагу из стекловолокна. Сохраните этот раствор для этапа очистки (5.3).

5.3. Очистка

5.3.1. Подготовка колонки с оксидом алюминия

Вставьте небольшую пробку из стекловаты в нижний конец стеклянной колонны (4.1) и утрамбуйте ее стеклянным стержнем. Отвешивают 11,0 г приготовленного оксида алюминия (3,5) и переносят в колонку. На этом этапе следует позаботиться о том, чтобы свести к минимуму воздействие атмосферы. Аккуратно постучите по нижнему концу загруженной колонки, чтобы окись алюминия осела.

5.3.2. Очистка проб

Переносят в колонку пипеткой 5,0 мл экстракта пробы, приготовленного в (5.2). Прижмите кончик пипетки к стенке колонки и дайте раствору впитаться оксидом алюминия. Робенидин элюируют из колонки 100 мл метанола (3.1) со скоростью потока 2–3 мл/мин и собирают элюат в круглодонную колбу емкостью 250 мл. Выпаривают раствор метанола досуха при пониженном давлении и температуре 40°С с помощью ротационного пленочного испарителя (4.3). Остаток повторно растворяют в 3–4 мл подвижной фазы (3.8) и количественно переносят в градуированную колбу вместимостью 10 мл. Промойте колбу несколькими порциями подвижной фазы по 1–2 мл и перенесите эти смывы в градуированную колбу. Долейте до метки тем же растворителем и перемешайте. Аликвоту фильтруют через фильтр 0,45 мм (4,7). Зарезервируйте этот раствор для определения ВЭЖХ (5.4).

5.4. Определение ВЭЖХ

5.4.1. Параметры

В качестве руководства предлагаются следующие условия; могут использоваться и другие условия, если они дают эквивалентные результаты:

Колонка жидкостная хроматографическая (4.4.1),

ВЭЖХ подвижная фаза (3.8),

Скорость потока: от 1,5 до 2 мл/мин,

Длина волны детектора: 317 нм,

Объем инъекции: от 20 до 50 мл.

Проверяют стабильность хроматографической системы, несколько раз вводя калибровочный раствор (3.9.3), содержащий 3,6 мг/мл, до достижения постоянной высоты пика и времени удерживания.

5.4.2. Калибровочный график

Вводят каждый калибровочный раствор (3.9.3) несколько раз и измеряют высоту (площадь) пика для каждой концентрации. Постройте калибровочную кривую, используя средние высоты пиков или площади калибровочных растворов по оси ординат и соответствующие концентрации в мг на мл по оси абсцисс.

5.4.3. Пример решения

Вводят экстракт образца (5.3.2) несколько раз, используя тот же объем, что и для калибровочных растворов, и определяют среднюю высоту (площадь) пиков робенидина.

6. Подсчет результатов

По средней высоте (площади) пиков робенидина раствора пробы определяют концентрацию раствора пробы в мг/мл, сверяясь с калибровочным графиком (5.4.2).

Содержание робенидина w (мг/кг) в пробе определяется по следующей формуле:

в котором:

c = концентрация робенидина в растворе образца в мг/мл,

m = масса испытательной позиции в граммах.

7. Проверка результатов

7.1. Личность

Идентичность аналита можно подтвердить с помощью совместной хроматографии или с помощью диодно-матричного детектора, с помощью которого сравнивают спектры экстракта пробы и калибровочного раствора (3.9.3), содержащего 6 мг/мл.

7.1.1. Кохроматография

Экстракт образца обогащают добавлением соответствующего количества калибровочного раствора (3.9.3). Количество добавленного робенидина должно быть аналогично расчетному количеству робенидина, обнаруженному в экстракте образца.

Следует увеличить только высоту пика робенидина с учетом как добавленного количества, так и разбавления экстракта. Ширина пика на половине его максимальной высоты должна находиться в пределах примерно 10 % от исходной ширины.

7.1.2. Обнаружение диодной матрицы

Результаты оцениваются по следующим критериям:

(a) длина волны максимального поглощения образца и стандартного спектра, записанная на вершине пика на хроматограмме, должна быть одинаковой в пределах, определяемых разрешающей способностью системы обнаружения. Для обнаружения с помощью диодной матрицы это обычно находится в пределах примерно 2 нм;

(b) в диапазоне от 250 до 400 нм спектры образца и стандарта, записанные на вершине пика хроматограммы, не должны отличаться для тех частей спектра, которые находятся в диапазоне от 10 до 100 % относительного поглощения. Этот критерий выполняется, когда присутствуют одни и те же максимумы и ни в одной наблюдаемой точке отклонение между двумя спектрами не превышает 15 % оптической плотности стандартного аналита;

(c) в диапазоне 250–400 нм спектры подъема, вершины и спада пика, полученного экстрактом образца, не должны отличаться друг от друга для тех частей спектра, которые находятся в диапазоне от 10 до 100 % относительного поглощения. Этот критерий выполняется при наличии одинаковых максимумов и когда во всех наблюдаемых точках отклонение между спектрами не превышает 15 % оптической плотности спектра апекса.

Если один из этих критериев не соответствует, присутствие аналита не подтверждено.

7.2. Повторяемость

Разница между результатами двух параллельных определений, проведенных на одной и той же пробе, не должна превышать 10 % более высокого результата при содержании робенидина более 15 мг/кг.

7.3. Восстановление

Для обогащенного холостого образца извлечение должно составлять не менее 85 %.

8. Результаты совместного исследования

Сообществом было организовано совместное исследование, в ходе которого 12 лабораторий проанализировали четыре образца корма для домашней птицы и кроликов в виде муки или гранул. Для каждого образца были проведены повторные анализы. Результаты приведены в таблице ниже:

"" ID="1">Среднее мг/кг> ID="2">27,00> ID="3">27,99> ID="4">43,6 > ID="5">40 ,1"> ID="1">Sr (мг/кг)> ID="2">1,46> ID="3">1,26> ID="4">1,44> ID=" 5">1,66"> ID="1">CVr (%)> ID="2">5,4> ID="3">4,5> ID="4">3,3> ID ="5">4,1"> ID="1">Sr (мг/кг)> ID="2">4,36> ID="3">3,36> ID="4">4 ,61> ID="5">3,91"> ID="1">CVR (%)> ID="2">16,1 > ID="3">12,0 > ID="4" >10,6 > ID="5">9,7"> ID="1">Восстановление (%)> ID="2">90,0 > ID="3">93,3 > ID=" 4">87,2 > ID="5">80,2 ""

Sr = стандартное отклонение повторяемости.

CVr = коэффициент вариации повторяемости

SR = стандартное отклонение воспроизводимости

CVR = коэффициент вариации воспроизводимости.

>

2. ОПРЕДЕЛЕНИЕ МЕТИЛБЕНЗОКВАТА 7-бензилокси-6-бутил-3-метоксикарбонил-4-хинолона 1. Цель и область применения

Этот метод предназначен для определения метилбензоквата в кормах. Нижний предел определения — 1 мг/кг.

2. Принцип

Метилбензокват экстрагируют из пробы метанольным раствором метансульфоновой кислоты. Экстракт очищают дихлорметаном ионообменной хроматографией, а затем снова дихлорметаном. Содержание метилбензоквата определяют методом обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с УФ-детектором.

3. Реагенты

3.1. дихлорметан

3.2. Метанол, сорт для ВЭЖХ

3.3. ВЭЖХ подвижная фаза:

смесь метанола (3.2) и воды (чистота для ВЭЖХ) 75+25 (об+об).

Фильтруют через фильтр с диаметром пор 0,22 мм (4.5) и дегазируют раствор (например, ультразвуком в течение 10 минут).

3.4. Раствор метансульфокислоты, s = 2 %

20,0 мл метансульфоновой кислоты разбавляют до 1000 мл метанолом (3.2).

3.5. Раствор соляной кислоты, s = 10 %

Разбавьте 100 мл соляной кислоты (P20 примерно 1,18 г/мл) до 1000 мл водой.

3.6. Катионообменная смола Амберлит CG-120 (Na), 100-200 меш

Смолу перед применением подвергают предварительной обработке: 100 г смолы растворяют в 500 мл раствора соляной кислоты (3.5) и нагревают на плитке до кипения, непрерывно помешивая. Дайте остыть и слейте кислоту. Фильтруют через фильтровальную бумагу под вакуумом. Смолу дважды промывают порциями по 500 мл воды, а затем 250 мл метанола (3.2). Промойте смолу еще 250 мл порцией метанола и высушите, пропуская воздух через осадок на фильтре. Храните высушенную смолу в бутылке с пробкой.

3.7. Стандартное вещество: чистый метилбензокват (7-бензилокси-6-бутил-3-метоксикарбонил-4-хинолон).

3.7.1. Стандартный раствор метилбензоквата, 500 мг/мл

Взвешивают с точностью до 0,1 мг, 50 мг стандартного вещества (3.7), растворяют в растворе метансульфоновой кислоты (3.4) в мерной колбе вместимостью 100 мл, доводят до метки и перемешивают.

3.7.2. Промежуточный стандартный раствор метилбензоквата, 50 мг/мл

5,0 мл исходного стандартного раствора метилбензоквата (3.7.1) переносят в градуированную колбу вместимостью 50 мл, доводят до метки метанолом (3.2) и перемешивают.

3.7.3. Калибровочные решения

Переносят 1,0, 2,0, 3,0, 4,0 и 5,0 мл промежуточного стандартного раствора метилбензоквата (3.7.2) в ряд градуированных колб вместимостью 25 мл. Доведите до метки подвижной фазой (3.3) и перемешайте. Эти растворы имеют концентрации метилбензоквата 2,0, 4,0, 6,0, 8,0 и 10,0 мг/мл соответственно. Эти растворы должны быть свежеприготовленными перед применением.

4. Аппарат

4.1. Лабораторный шейкер

4.2. Ротационный пленочный испаритель

4.3. Стеклянная колонка (250 мм × 15 мм), снабженная запорным краном и резервуаром емкостью примерно 200 мл.

4.4. Оборудование для ВЭЖХ с ультрафиолетовым детектором с переменной длиной волны или диодным детектором

4.4.1. Жидкостная хроматографическая колонка: 300 мм × 4 мм, C-18, насадка 10 мм или эквивалентная.

4.5. Мембранные фильтры, 0,22 мм

4.5. Мембранные фильтры, 0,45 мм

5. Процедура

5.1. Общий

5.1.1. Холостое сырье следует проанализировать, чтобы убедиться в отсутствии метилбензоквата и мешающих веществ.

5.1.2. Тест на восстановление следует проводить путем анализа контрольного корма, обогащенного добавлением количества метилбензоквата, аналогичного количеству, присутствующему в образце. Для обогащения до уровня 15 мг/кг добавьте 600 мл исходного стандартного раствора (3.7.1) к 20 г холостого сырья, перемешайте и подождите 10 минут, прежде чем приступить к этапу экстракции (5.2).

Примечание: для целей данного метода холостое сырье должно быть аналогично типу образца, и при анализе метилбензокват не должен обнаруживаться.

5.2. Добыча

Взвесьте с точностью до 0,01 г примерно 20 г приготовленной пробы и перенесите в коническую колбу емкостью 250 мл. Добавляют 100,0 мл раствора метансульфоновой кислоты (3.4) и механически встряхивают (4.1) в течение 30 минут. Отфильтруйте раствор через фильтровальную бумагу и сохраните фильтрат для этапа разделения жидкость-жидкость (5.3).

5.3. Перегородка жидкость-жидкость

Переносят в делительную воронку емкостью 500 мл, содержащую 100 мл раствора соляной кислоты (3.5), 25,0 мл фильтрата, полученного в (5.2). Добавьте в воронку 100 мл дихлорметана (3.1) и встряхивайте в течение одной минуты. Дайте слоям разделиться и слейте нижний слой (дихлорметан) в круглодонную колбу емкостью 500 мл. Повторите экстракцию водной фазы двумя дополнительными порциями дихлорметана по 40 мл и объедините их с первым экстрактом в круглодонной колбе. Дихлорметановый экстракт выпаривают досуха на роторном испарителе (4.2), работающем при пониженном давлении и температуре 40°С. Растворяют остаток в 20–25 мл метанола (3.2), закрывают колбу пробкой и сохраняют весь экстракт для ионного обмена. хроматография (5.4).

5.4. Ионообменная хроматография

5.4.1. Приготовление катионообменной колонки

Вставьте заглушку из стекловаты в нижний конец стеклянной колонны (4.3). Приготовьте суспензию 5,0 г обработанной катионообменной смолы (3.6) с 50 мл соляной кислоты (3.5), вылейте в стеклянную колонку и дайте отстояться. Слейте лишнюю кислоту так, чтобы она находилась чуть выше поверхности смолы, и промывайте колонку водой до тех пор, пока сточные воды не станут нейтральными по отношению к лакмусу. Перенесите 50 мл метанола (3.2) в колонку и дайте стечь на поверхность смолы.

5.4.2. Колоночная хроматография

С помощью пипетки осторожно перенесите экстракт, полученный в (5.3), на колонку. Промывают круглодонную колбу двумя порциями метанола по 5–10 мл (3.2) и переносят эти промывные воды в колонку. Выпускают экстракт на поверхность смолы и промывают колонку 50 мл метанола, следя за тем, чтобы скорость потока не превышала 5 мл в минуту. Выбросьте сточные воды. Элюируйте метилбензокват из колонки 150 мл раствора метансульфоновой кислоты (3,4) и собирайте элюат колонки в коническую колбу емкостью 250 мл.

5.5. Перегородка жидкость-жидкость

Элюат, полученный в (5.4.2), переносят в делительную воронку емкостью 1 л. Промойте коническую колбу 5–10 мл метанола (3.2) и объедините промывные воды с содержимым делительной воронки. Добавляют 300 мл раствора соляной кислоты (3.5) и 130 мл дихлорметана (3.1). Встряхните в течение 1 минуты и дайте фазам разделиться. Сливают нижний слой (дихлорметан) в круглодонную колбу емкостью 500 мл. Повторяют экстракцию водной фазы еще двумя порциями дихлорметана по 70 мл и объединяют эти экстракты с первыми в круглодонной колбе.

Дихлорметановый экстракт выпаривают до сухого состояния на ротационном испарителе (4.2), работающем при пониженном давлении и температуре 40°С. Растворяют остаток в колбе примерно в 5 мл метанола (3.2) и количественно переносят этот раствор в градуированную колбу вместимостью 10 мл. Ополосните круглодонную колбу еще двумя порциями метанола по 1–2 мл и перенесите их в градуированную колбу. Доведите до метки метанолом и перемешайте. Аликвотную порцию фильтруют через мембранный фильтр (4.6). Зарезервируйте этот раствор для определения ВЭЖХ (5.6).

5.6. Определение ВЭЖХ

5.6.1. Параметры

В качестве руководства предлагаются следующие условия; могут использоваться и другие условия при условии, что они дают эквивалентные результаты:

- жидкостная хроматографическая колонка (4.4.1),

- подвижная фаза ВЭЖХ: смесь метанол-вода (3.3),

- скорость потока: от 1 до 1,5 мл/мин,

- длина волны обнаружения: 265 нм,

- Объем инъекции: от 20 до 50 мл.

Проверяют стабильность хроматографической системы, несколько раз вводя калибровочный раствор (3.7.3), содержащий 4 мг/мл, до достижения постоянной высоты или площади пиков и времени удерживания.

5.6.2. Калибровочный график

Вводят каждый калибровочный раствор (3.7.3) несколько раз и измеряют высоту (площадь) пика для каждой концентрации. Постройте калибровочный график, используя средние высоты пиков или площади калибровочных растворов в качестве ординат и соответствующие концентрации в мг/мл в качестве абсцисс.

5.6.3. Пример решения

Введите экстракт образца (5.5) несколько раз, используя тот же объем, что и для калибровочных растворов, и определите среднюю высоту (площадь) пиков метилбензоквата.

6. Подсчет результатов

Концентрацию раствора пробы определяют в мг/мл по средней высоте (площади) пиков метилбензоквата раствора пробы, сверяясь с калибровочным графиком (5.6.2).

Содержание метилбензоквата в массе (мг/кг) в образце определяется по следующей формуле:

в котором:

c = концентрация метилбензоквата в растворе пробы в мг/мл,

m = масса исследуемой порции в граммах.

7. Проверка результатов

7.1. Личность

Идентичность аналита можно подтвердить с помощью совместной хроматографии или с помощью диодно-матричного детектора, с помощью которого сравнивают спектры экстракта пробы и калибровочного раствора (3.7.3), содержащего 10 мг/мл.

7.1.1. Кохроматография

Экстракт пробы обогащают добавлением соответствующего количества раствора промежуточного стандарта (3.7.2). Количество добавленного метилбензоквата должно быть аналогично расчетному количеству метилбензоквата в экстракте образца. Следует увеличивать только высоту пика метилбензоквата с учетом как добавленного количества, так и разбавления экстракта. Ширина пика на половине его максимальной высоты должна находиться в пределах примерно 10 % от исходной ширины.

7.1.2. Обнаружение диодной матрицы

Результаты оцениваются по следующим критериям:

(а) длина волны максимального поглощения образца и стандартных спектров, записанных на вершине пика хроматограммы, должна быть одинаковой в пределах, определяемых разрешающей способностью системы обнаружения. Для обнаружения с помощью диодной матрицы это обычно находится в пределах примерно 2 нм;

(b) в диапазоне 220–350 нм спектры образца и стандарта, записанные на вершине пика хроматограммы, не должны отличаться для тех частей спектра, которые находятся в диапазоне от 10 до 100 % относительного поглощения. Этот критерий выполняется, когда присутствуют одни и те же максимумы и ни в одной наблюдаемой точке отклонение между двумя спектрами не превышает 15 % оптической плотности стандартного аналита;

(c) в диапазоне 220–350 нм спектры подъема, вершины и спада пика, полученного экстрактом образца, не должны отличаться друг от друга для тех частей спектра, которые находятся в диапазоне от 10 до 100 % относительного поглощения. Этот критерий выполняется при наличии одинаковых максимумов и когда во всех наблюдаемых точках отклонение между спектрами не превышает 15 % оптической плотности спектра апекса.

Если один из этих критериев не соответствует, присутствие аналита не подтверждено.

7.2. Повторяемость

Разница между результатами двух параллельных определений, выполненных на одной и той же пробе, не должна превышать: 10 % относительно более высокого результата для содержаний метилбензоквата от 4 до 20 мг/кг.

7.3. Восстановление

Для обогащенного холостого образца извлечение должно составлять не менее 90 %.

8. Результаты совместного исследования

Пять проб были проанализированы в 10 лабораториях. Для каждого образца были проведены повторные анализы.

Полученные результаты

"" ID="1">Среднее значение (мг/кг)> ID="2">нет данных> ID="3">4,50> ID="4">4,50> ID="5">8 ,90> ID="6">8,70"> ID="1">Sr (мг/кг)> ID="2">-> ID="3">0,30> ID="4" >0,20> ID="5">0,60> ID="6">0,50"> ID="1">CVr (%)> ID="2">-> ID="3" >6,70> ID="4">4,40> ID="5">6,70> ID="6">5,70"> ID="1">Sr (мг/кг)> ID ="2">-> ID="3">0,40> ID="4">0,50> ID="5">0,90> ID="6">1,00"> ID= "1">CVR (%)> ID="2">-> ID="3">8,90> ID="4">11,10> ID="5">10,10> ID=" 6">11,50"> ID="1">Восстановление (%)> ID="2">-> ID="3">92,00> ID="4">93,00> ID=" 5">92,00> ID="6">89,00""

без даты = не обнаружено.

Sr = стандартное отклонение повторяемости.

CVr = коэффициент вариации повторяемости.

SR = стандартное отклонение воспроизводимости.

CVR = коэффициент вариации воспроизводимости.

>